Wie kann ich feststellen, ob die Regulation auf Transkriptions- oder Translationsebene erfolgt?

Ich habe ein Papier gelesen, http://www.pnas.org/content/109/8/E471.short , wo die Autoren behaupten, dass (e475)

Die Translation des TfR (Transferrin-Rezeptor) wird durch Sequenzen in den 3'- und 5'-UTRs (untranslatierten Regionen) seiner mRNA reguliert. Um die Regulation von TfR-Spiegeln unabhängig von der Translationskontrolle zu untersuchen, haben wir die Spiegel von TfR-EGFP gemessen, die von einem Plasmid exprimiert wurden, dem die regulatorischen Sequenzen fehlen, die in der endogenen TfR-mRNA vorhanden sind ( 6A ). Endogene und GFP-markierte exprimierte TfR-Spiegel wurden als Reaktion auf die Depletion von Rabenosyn-5 gleichermaßen reduziert , was eine Wirkung dieses Proteins auf die transkriptionelle oder translationale Kontrolle der TfR-Expression ausschließt .

Ich glaube, ich verstehe, dass die Wirkung nicht posttranslational sein kann, da TfR-GFP keine Region für die translationale Regulation hat und daher nicht durch einen translationsaktiven Regulationsfaktor reguliert werden kann.

Meine Frage ist: Würde die obige Aussage, dass Rabenosyn-5 keine Wirkung auf die Proteintranskription hat, nicht einen Beweis erfordern, dass die mRNA-Spiegel durch dieses Protein nicht beeinflusst werden?

http://www.pnas.org/content/109/8/E471.figures-only

Abb. 6A, http://www.pnas.org/content/109/8/E471.figures-only

Antworten (1)

Aus dem Abschnitt Methoden:

Menschliches TfR in Plasmid-cDNA war ein Geschenk von Tim McGraw (Weill-Cornell Medical College, New York, NY). Menschliche TfR-cDNA wurde im Leserahmen mit EGFP in den Clontech-pEGFP-N1-Vektor an den XhoI- und BamHI-Restriktionsstellen subkloniert.

Dieses TfR-GFP-Fusionsprotein besitzt nicht den endogenen TfR-Promotor. Es ist also unwahrscheinlich, dass es von einem TF reguliert wird, der die TfR-Transkription direkt regulieren würde.

Sie schließen daraus, dass Rabenosyn-5 die TfR-Expression nicht spezifisch reguliert.

Aha. Ich denke, wenn das cDNA-Plasmid irgendeine regulatorische Sequenz gehabt hätte, hätten sie es angegeben.
cDNA kann 5'- und 3'-UTRs haben, aber das ist hier nicht der Fall.
Wie kann ich feststellen, ob die Regulation auf Transkriptions- oder Translationsebene erfolgt?
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