Optikausrichtung eines konfokalen Rastermikroskops

Ich stehe in meinem Projekt vor einer Herausforderung bezüglich optischer Ausrichtung.

Siehe Abbildung:

Geben Sie hier die Bildbeschreibung ein

Die Herausforderung liegt in der vertikalen Ausrichtung des optischen Systems. Ich überlegte, einen Spiegel zu platzieren und zu überprüfen, ob Bild und Quelle übereinstimmen. Aber da hat das Licht zu wenig Strom (weniger hell).

Wie kann ich es so gut ausrichten, dass alles absolut senkrecht und gut ist?

Ihre Quelle scheint a zu sein ≈ 30 M W Emitter, der durch die Lochblende und nachfolgende optische Komponenten gedämpft wird. Welche Komponenten sind gut aufeinander abgestimmt? Ist die Frage zur vertikalen Ausrichtung der optische Pfad M1-M2 in Ihrem Bild?
Alles bis das Mikroskopsystem ausgerichtet ist. Die vertikalen Komponenten sind M1 M2 und M3 und O. M1 und M2 sind im Grunde Periskopbaugruppen. Ich möchte nur sicherstellen, dass die Strahlbahn vertikal und parallel zum optischen Steckbrett ist.
Bitte drehen Sie Ihren Strahlteiler in Ihr Bild. Dann kann Ihr Erkennungspfad (grün) auf Ihrer CCD-Kamera enden.
ja das war nur eine Darstellung von Beamsplitter. Schlagen Sie mir jedoch ein anderes Ziel vor, das ich verwenden kann und das ein sichtbares PSF fluoreszieren kann ... Irgendwelche Gemeinsamkeiten?
Ich habe auch vergessen hinzuzufügen, dass dies (für Leute, die sich mit Optik beschäftigen) ein konfokales Scan-Setup ist. Die Ausrichtung und Wahl des Stiftlochs entscheidet über die Schärfentiefe auf dem Ziel. Nur eine Info für Interessierte.

Antworten (2)

Das Grundkonzept der optischen Ausrichtung besteht darin, den Strahl Schritt für Schritt perfekt auf alle optischen Elemente auszurichten. Stellen Sie vor der Ausrichtung sicher, dass Ihr Strahl die richtige Höhe und den richtigen Winkel hat. Ihr Ziel ist es, den Strahl auf die optische Achse des Mikroskops auszurichten. Die Verwendung von Punktquellen wie (z. B. fluoreszierende Perlen, Mikrokügelchen, Quantenpunkte, Quantentöpfe, NV-Zentren in Diamant) ermöglicht eine einfache Ausrichtung auf eine Punktverteilungsfunktion auf Ihrem CCD-Sensor.

On-axis mit Irisblende

Eine schnelle Methode verwendet eine Irisblende, um einen Strahl parallel zur optischen Achse zu erzeugen . Iris einsetzen A zwischen M3 und M2. Die offene Irisblende sollte ermöglichen, dass der Strahl in der Mitte übertragen wird. Platzieren Sie einen Spiegel senkrecht zur optischen Achse auf der Translationsstufe, und entfernen Sie das Mikroskopobjektiv und das Okular. Der Strahl wird am Planspiegel reflektiert und trifft ggf. auf die Rückseite der Irisblende.

Winkel- und Positionsausrichtung iterieren

Verwenden Sie M3, um den Strahl auf der Rückseite der Irisblende zu zentrieren, während Sie die Blende nach oben und unten bewegen. Eventuelle Positionsfehler sollten mit den Spiegeln M1 und M2 ausgerichtet werden. Diese haben den größten Einfluss auf die Position. Beginnen Sie die Iteration mit der Winkelausrichtung. Diese grobe Ausrichtung sollte es ermöglichen, Mikroskopelemente einzusetzen und den Strahl fein auf das Mikroskopobjektiv auszurichten.

Sehr gute Informationen. Die Verwendung einer Iris sollte helfen. Gibt es ein anderes täglich gesehenes Objekt, das die fluoreszierenden Perlen ersetzen kann? Ich besitze keine Perlen als Geschenk.
Mir ist keine alltagstaugliche Lichtquelle als Punktquelle in diesem Fall bekannt. Fluoreszierende Kügelchen (googeln gibt Mikrokugeln für unter 300 Dollar), Quantenpunkte, Quantentöpfe, NV-Zentren in Diamant ... was auch immer zu Ihrer Anregungswellenlänge passt.
Hervorragende Zusammenfassung. Eine Firma, für die ich viel arbeite, hat früher ein kommerzielles Labor aufgebaut, das dem von Abhilash und Stefan sehr ähnlich ist. Der Rat von Abhilash und Stefan ist genau richtig. Ich würde hinzufügen: Seien Sie bei der Auswahl fluoreszierender Kugeln nicht zu sehr versucht, sich für wirklich kleine zu entscheiden (die Ihnen eine genaue PSF geben würden). Wählen Sie etwas mit einem Durchmesser von etwa 5 Mikron – sie sind klein genug, um ausgerichtet zu werden, aber hell genug, um für die Ausrichtung gut zu sehen. Nachdem Sie Ihr Setup zum Laufen gebracht haben, wählen Sie DANN etwas Kleineres, wenn Sie die Leistung messen müssen. Diese Jungs geben 5-um-Kugeln für 125 $: spherotech.com/2012%20Price%20List.pdf

Eine Low-Tech-Version einer punktförmigen Quelle auf der Bühnenebene ist die Verwendung einer Lochblende (sehr klein, abhängig von der Vergrößerung Ihres Objektivs, z. B. 1 um - 10 um). Beleuchten Sie dann die Rückseite der Lochblende mit einem Laser. Sie erhalten eine Quasi-Punktquelle, natürlich nicht gut für die Bestimmung von PSFs, aber vielleicht genug für die Ausrichtung ...

Optikausrichtung eines konfokalen Rastermikroskops
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