Für mein Projekt züchte ich Bäckerhefe und Probiotika in zwei Flüssigkulturen, bevor ich sie vermische und plattiere. Ich versuche, die Wirkung der Probiotika auf die Hefe zu messen. Wie könnte ich die Menge an Pilzen auf der Platte messen, ob durch Zellzählung oder Oberfläche?
Sie können die einzelnen Kolonien auf der Platte zählen, wobei diese Zahl die Anzahl der "Colony Forming Units" (KBE) ist, da theoretisch nur eine einzige Zelle benötigt wird, um eine Kolonie zu laichen.
Dazu müssen Sie jedoch vor dem Ausplattieren eine Reihenverdünnung Ihrer Flüssigkulturen durchführen, sodass Sie eine Platte mit 10 erhalten Verdünnung, dann 10 , 10 usw., wird im Allgemeinen eine zehnfache Verdünnung durchgeführt.
Hoffentlich ergibt dies mindestens eine Platte mit einer zählbaren Anzahl von Kolonien, das heißt - nicht zu viele und nicht zu wenige - normalerweise 30-300.
cfu/ml = (Anzahl Kolonien x Verdünnungsfaktor) / Volumen der ausplattierten Kultur
Dies ergibt normalerweise eine sehr große Zahl, daher ist es üblich, das Protokoll dieser Zahl zu nehmen und dies als Ihr Ergebnis anzugeben.
Und dann können Sie Ihre Ergebnisse zwischen Probiotika vergleichen. Es ist eine sehr gute Idee, jede Verdünnung zu wiederholen!
Wie vom Benutzer GrumpyMammoth erklärt, können Sie Reihenverdünnungen durchführen, bis die Kolonien gering genug sind, um gezählt zu werden, und dann die KBE mithilfe des Verdünnungsfaktors berechnen.
Wenn Sie die Kolonien nicht selbst zählen möchten, können Sie die Funktion "Partikel analysieren" von ImageJ verwenden. Dadurch erhalten Sie die Anzahl der Kolonien.
Die Funktion "Partikel analysieren" von ImageJ gibt Ihnen auch die Koloniegröße (Oberfläche) in Pixeln. Dies kann in ImageJ in Millimeter umgewandelt werden, indem Sie die Registerkarte Bild> Eigenschaften öffnen und den Parameter Pixelbreite ändern.