Wie wirkt sich eine Änderung der Konzentration eines Tris-Puffers auf die Aktivität des Amylase-Enzyms aus?

Wenn Sie beispielsweise die Tris-Menge erhöhen, sich der pH-Wert jedoch immer noch nicht ändert, verläuft die Enzymaktivität dann immer noch normal? Wenn es den pH-Wert ändert, ändert es die Enzymstruktur und warum?

Ich bin ein Anfänger in Biologie, aber das Googeln von "Amylase ph" führte zu einem empfohlenen pH-Wert von 7,0 für "humane Pankreas-Alpha-Amylase". Würde es also nicht vom pH-Wert des Tris abhängen, was ich vergessen habe, da es viele verschiedene Arten von Tris-Pufferzubereitungen gibt? Das Googeln von "Tris" führte zu einer Wikipedia-Seite mit einem pH-Wert von 8,0. Hätte es angesichts dieser Informationen nicht weniger Funktionalität?
Würde eine Erhöhung der Tris-Menge, aber keine Änderung des pH-Werts etwas Signifikantes bewirken?
Ehrlich gesagt, ich wüsste es nicht. Aber eine Erhöhung der Tris-Menge würde eine Änderung des pH-Werts verursachen, nicht wahr? Es sei denn, Sie wollen es mit etwas Basigem oder Saurem ausgleichen? Und dann wüsste ich es in diesem Fall immer noch nicht. Ich dachte immer, TRIS würde nur verwendet, um den optimalen pH-Wert für Enzyme und dergleichen zu erhalten, und der pH-Wert war der Grund für die Verwendung.
Unter der Annahme, dass das Tris gegenüber der Reaktion chemisch inert ist, erhöht eine höhere Menge an Tris die Pufferkapazität (dh der pH-Wert ändert sich weniger).

Antworten (2)

Mir ist klar, dass ich 4 Jahre zu spät bin, aber ich wollte darauf eine Antwort geben. Es scheint, dass Tris häufig hemmende Wirkungen auf die Amylaseaktivität hat. Die Zugabe von mehr Tris führt zu einer kompetitiven Hemmung mit dem Substrat und verzerrt die Ergebnisse.

Die Bindung von Tris an Alpha-Amylase aus Bacillus licheniformis kann seine Stärkehydrolyseaktivität beeinflussen https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18289113

Nach 4 Jahren Arbeit in der Enzymologie muss ich sagen, dass Tris zuallererst wirklich schwierig ist, wenn Sie mehr Tris verwenden, um den pH-Wert auf dem gleichen Wert wie zuvor zu halten, müssen Sie den pH-Wert neu einstellen, da Tris etwa 9 beträgt, aber die meisten Enzyme funktionieren 6 bis 7,5 (für Alpha-Amylase ist es 5,8), wenn Sie dies nicht tun, funktioniert Ihr Enzym nicht richtig, es braucht einen sehr niedrigen oder hohen pH-Wert, um die 3D-Struktur des Enzyms zu zerstören, also können wir einfach sagen, dass es seine Funktionalität verliert, wenn Sie es tun Einstellen des pH-Werts Eine hohe Konzentration kann zu Problemen führen, z. B. wenn Amylase in der Umgebung subtrahiert wird und sie sich nicht mit dem Enzym verbinden lässt. In einigen Fällen hat die Säure, die Sie zum Einstellen des pH-Werts verwenden, in diesem Fall toxische Auswirkungen auf das Enzym Chlor, aber der beste Weg ist mit ziemlicher Sicherheit die Optimierung verstehe die Reaktion. Mit freundlichen Grüßen .

Wie wirkt sich eine Änderung der Konzentration eines Tris-Puffers auf die Aktivität des Amylase-Enzyms aus?
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