Einzelphotonenzählung mit GHz-Rate

Die Fluoreszenzlebensdauer von Molekülen, die in biologischen Anwendungen verwendet werden, liegt in der Regel im Sub-ns- bis zu einigen ns-Zeitbereich (sagen wir 0,8–4). Die direktesten Methoden zur Messung von Lebensdauern umfassen typischerweise Gating (entweder explizit oder über Zeitkorrelationen).

Aber das ist schrecklich verschwenderisch, da Informationen von jenen Photonen verworfen werden, die nicht zu einem ausgewählten Zeitpunkt gekommen sind. Wenn Sie eine empfindliche Probe haben, können Sie sie zerstören, bevor Sie Ihre Messung beenden; Wenn Sie einen sich schnell ändernden Prozess haben, kann sich der Zustand geändert haben, bevor Sie die Messung abgeschlossen haben.

Was ist der Stand der Technik bei der anhaltenden Photonenzählung im sichtbaren Bereich (vielleicht 450-600 nm), und befindet er sich auf einem Niveau, auf dem man jedes Photon vernünftig zeitlich bestimmen könnte, ohne die Zählraten drastisch unter die Fluoreszenzlebensdauer selbst senken zu müssen? Die Photophysik erlaubt die Messung der Lebensdauer mit einer MHz-Rate (~100 Photonen in 10-ns-Intervallen), aber ist es praktisch, dies tatsächlich zu tun?

Obwohl es eine Vielzahl von Optionen für die Photonenzählung gibt (PMTs, APDs, GaAsPs), war es für mich schwierig, mir ein genaues Bild von den Geschwindigkeiten und Einschränkungen verschiedener tatsächlich verfügbarer Geräte oder der physikalischen Grenzen eines bestimmten Typs zu machen des Erkennungsschemas. Leiden beispielsweise PMTs unter unscharfen Auslesezeiten aufgrund der Verteilung der Elektronenweglängen in der Kaskade? Machen thermische Effekte APDs unbrauchbar für ein anhaltendes Auslesen mit hoher Rate, selbst wenn sie klein genug sind, sodass die Kapazität kein großes Hindernis für das Wiederaufladen darstellt? (Oder ist die Kapazität für GHz-Raten unmöglich schlecht, selbst bei sehr kleinen Geräten, z. B. 100 um im Quadrat?)

Von welchem ​​Teil des Spektrums sprichst du?
Meinen Sie so etwas wie Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung (FLIM)?
@biologue - Ja, die Anwendung wäre FLIM. (Und/oder zeitliches Multiplexing.)

Antworten (2)

Ein Schema, das von mehreren aktuellen Teilchenphysik-Detektoren verwendet wird, kann mit ziemlicher Sicherheit zum Laufen gebracht werden (obwohl es im Allgemeinen kundenspezifische Hochgeschwindigkeitselektronik beinhaltet, die ziemlich teuer ist; vielleicht kann ein kleines System mit nur einem guten FPGA davonkommen ...).

Das Grundschema besteht darin, die Ausgabe der primären Detektoren (PMTs oder was auch immer) kontinuierlich in einen Ringpuffer von Ringpuffern zu digitalisieren. Die beiden Instanzen dieses Systems, mit denen ich gearbeitet habe, verwendeten ADC-Breiten 8 -- 32 n s , aber daran ist nichts Besonderes: Sie könnten ziemlich leicht und ungefähr auf etwa 1 ns herunterkommen 0,1 n s sollte möglich sein.

Auf der Elektronikebene wird das Primärsignal vorverstärkt (falls erforderlich/gewünscht, oft ist die primäre Detektorverstärkung ausreichend) und (mindestens) dem Trigger und der digitalen Elektronik zugeführt.

Die digitale Elektronik wird durch unterstützt N Ringpuffer von M Proben jeweils. Jeder Puffer hält auch Zeiger auf den Anfang und das Ende der kürzlich geschriebenen Daten. Das System arbeitet zu jeder Zeit an einer Probe m [ 0 , M ) Puffer n [ 0 , N ) ; die Probe ist geschrieben und die Arbeitsprobe ist fortgeschritten m := ( m + 1 ) Mod M . Falls kein Trigger auftritt, darf das System kontinuierlich "uninteressante" Daten als überschreiben m durchläuft den gesamten Bereich.

Wenn ein Trigger auftritt, rückt das System den Puffer vor n := ( n + 1 ) Mod N damit die neuesten Puffer nicht überschrieben werden.

Das Datenerfassungssystem kann dann die zwischengespeicherten Puffer auslesen, wenn Zeit verfügbar ist, und die "interessanten" Teile des Signals rekonstruieren. (Wenn Sie wissen müssen, wie die "uninteressanten" Teile des Signals aussehen, können Sie immer einen falschen Trigger erzeugen, um das "Nichts" zu speichern; dies wird als "Minimum Bias" oder "Random" Trigger bezeichnet und Sie brauchen im Allgemeinen einen .)

Die Größe der einzelnen Puffer wird so gewählt, dass sichergestellt ist, dass sich das gesamte Signal in einem einzigen zwischengespeicherten Fenster befinden sollte. Die Anzahl der benötigten Puffer hängt von der erwarteten Rate und der Ausleselatenz ab. Sie brauchen ein Schema, um mit Triggern umzugehen, die so nahe beieinander liegen, dass der "nächste" Puffer immer noch veraltete Daten enthält (nur teilweise überschrieben), und andere Probleme, die Sie sicher selbst sehen können, wenn Sie darüber nachdenken.

Dies zählt nicht unbedingt Photonen, es ermöglicht Ihnen, das analoge Signal vom Detektor mit einer zeitähnlichen Granularität in der Größenordnung der Abtastbreite ungefähr zu rekonstruieren. Sie können also nicht unbedingt den Unterschied zwischen beispielsweise zwei grünen Photonen in enger Übereinstimmung und einem nahen UV-Photon erkennen, aber dies ist oft gut genug.

Ich vermute, dass Hochgeschwindigkeits-Oszilloskope intern etwas Ähnliches tun.

Das ist definitiv Teil der Lösung (+1), aber glücklicherweise kann man ADC-Karten kaufen, die genau das mit machen M = 2 während die bereits geschriebene Hälfte der Daten für die FPGA-Verarbeitung präsentiert wird. Aber wenn die vorgeschalteten Detektoren kein geeignetes analoges Signal erzeugen, ist es nutzlos – Sie müssen wirklich die Ankunftszeiten der Photonen zählen, damit dies funktioniert, was bedeutet, dass Sie Photonen zählen müssen.
Rex, wir erhalten eine Zwei-Signal-Unterscheidung auf einer Zeitskala von 2 ADC-Bins und ein einzelnes Peak-Timing ist etwas besser als 1 ADC-Bin. Weiß nicht, ob das gut genug ist.
Das ist gut genug, und das würde ich bei entsprechenden Detektoren auch erwarten. Doch welche Detektoren sind geeignet? Die Wahl zwischen APDs, PMTs, HPDs usw. scheint nicht trivial zu sein, und die falsche Wahl scheint einen um den Faktor 2 oder mehr in einem Regime zu verletzen, in dem Faktoren von 2 wirklich wichtig sind.
Ich kenne eigentlich nur PMTs gut. Sie können ein gutes Mehrfachimpulsverhalten erzielen, aber Sie werden dafür bezahlen. Vor allem, wenn Sie auch einen hohen Gewinn wollen (10 Millionen). Sie könnten auch MCPs mit feinkörniger Instrumentierung in Betracht ziehen – die Chancen, zwei Treffer auf einem einzigen Detektor zu erhalten, sinken, wenn Sie viele unabhängige Kanäle haben.
Haben PMTs keine ernsthaften Dunkelstromprobleme (es sei denn, sie werden kryogen gekühlt)?
@AntillarMaximus Das tun sie, aber es ist sehr zuverlässig, sodass Sie es einfach abziehen können - das stellt natürlich Anforderungen an das Elektronikdesign. In einer der Anwendungen, an denen ich beteiligt bin, sind sie kryogen (in einem Flüssigargondetektor), also ist selbst das kein Problem.
@dmckee Ich glaube nicht, dass die Subtraktion für NIR gut funktionieren wird. Zumindest die von uns verwendeten waren bei 860nm nicht gut genug. Wir sind stattdessen auf PerkenElmer-Photonenzählmodule umgestiegen.
@AntillarMaximus PMT-Leistungsmerkmale variieren stark zwischen Röhrendesigns und Basiskonfigurationen. In den beiden Reaktor-Neutrino-Experimenten, an denen ich beteiligt war, haben wir Zehntausende von Röhrenjahren, in denen Geräte bei Raumtemperatur mit sehr hoher Verstärkung betrieben wurden, ohne dass im Wesentlichen dunkle Ereignisse über dem 1/4- oder 1/3-SPE-Signalpegel lagen. Ich habe noch nie NIR-Röhren verwendet, gehe aber davon aus, dass sie ein um den Faktor sieben schlechteres DN / SPE-Verhältnis haben (2 für die Photonenenergie und ungefähr e für die Größe der thermischen Schwankungen).

Ab Februar 2016 gibt es zwei Möglichkeiten, Photonen mit Raten von mehr als GHz tatsächlich zu zählen, die erschwinglich und technisch einwandfrei sind. Die Technologie hat sich weiterentwickelt, im Gegensatz zu übertriebener Spezifikationen. Hamamatsu stellt eine Hybridröhre R10467U-40 mit 45 % QE im sichtbaren Bereich und der Fähigkeit her, Photonen mit Raten von mehreren GHz zu zählen. Dies wurde für LIDAR unter Verwendung eines doppelten YAG-Lasers bei NPS erreicht. Lidar-Signale sind eine Kombination aus exponentiellem Abfall und 1/R^2, und die Hybrid-Röhre eignet sich hervorragend zum Verringern von Signalen. Dies ähnelt dem Fluoreszenzzerfall, ist jedoch aufgrund des großen Dynamikbereichs und des extrem variierenden Signals schwieriger. Hamamatsu hat eine andere Röhre, die auch eine anhaltende GHz-Zählung ermöglicht, die funktionieren würde, aber nicht so für diese Anwendung geeignet ist.

Auf der letzten Seite des folgenden Weblinks gibt es Literatur, die unter About Photon Counting die Stärken und Schwächen verschiedener Detektoren vergleicht. Die Hersteller neigen dazu, nicht auf die Schwächen verschiedener Detektoren hinzuweisen, aber dieser Artikel basiert auf 40 Jahren Erfahrung.

http://www.photoncounting.net/

Kürzlich wurde ein neuer digitaler Schnittstellenausgang zur Hybridröhre entwickelt und getestet. Der Photonenzähler im Link kann 250-ps-Bins ausführen, indem alle vier Kanäle verwendet werden, oder man kann 10x so viel bezahlen und eine etwas bessere Bin-Auflösung erhalten. Zwei der Verstärker in der Verbindung würden eine 2-GHz-Photonenzählung ermöglichen.

Im Gegensatz zu Elektronenvervielfachern kann sich die Hybridröhre von einem großen Signal in einer Nanosekunde ohne Abklingfahne erholen. Eine genaue Messung der Fluoreszenzlebensdauer würde am besten durch das Sammeln einer großen Anzahl von Photonen erfolgen, anstatt ihre Ankunftszeit auf wenige Pikosekunden zu messen, und die 10-MHz-Photonenzählung hätte Schwierigkeiten, dies zu tun. Die Ghz-Photonenzähltechnik ist eine enorme Verbesserung gegenüber der Ultrazentrifugen-Lichtzerhackertechnik mit 20.000 U / min, die ich verwendet habe, um die Zerfallslebensdauer im Subnanosekundenbereich mit einem PMT im Mittelalter zu messen.

Die Gesamtkosten für ein GHz-System sollten unter der Annahme, dass man ein digitales Oszilloskop hat, weniger als viertausend Dollar betragen. Die meisten Firmen veröffentlichen ihre Preise für die Photonenzähler nicht mehr. Zwei Unternehmen, die ultraschnelle Systeme herstellen, sind:

http://www.fastcomtec.com/products/ultra-fast-photon-counters.html

und

http://www.becker-hickl.de/

Diese Photonenzähler sind in der Regel teuer - 5000 EU bis 15.000 EU. Die ausgezeichnete Literatur bei Becker-hickl beschreibt Messungen der Hybridröhre und Techniken zum Fluoreszenzzerfall.

Es sind jetzt erschwingliche digitale Logikchips mit Anstiegszeiten von 30 Pikosekunden und Umschaltraten von über 10 GHz verfügbar. Es ist Zeit für ein Update zu dieser Frage.

Dies ist eine großartige Informationsquelle, genau das, wonach ich gesucht habe, als ich die Frage gestellt habe! (Obwohl die Technologie nicht wirklich in ausgefeilter Form existierte, als ich fragte.) Danke!