Warum erscheint geschmolzene Agarose in Lösung vollständig transparent, wird aber bei der Polymerisation undurchsichtig?

Agarosegele (Hydrogele) werden üblicherweise in der Molekularbiologie für die Elektrophorese von DNA verwendet.

Wenn eine Lösung aus heißer Agarose gegossen wird, ist das Material klar: Geben Sie hier vorformatierten Text einWenn sich ein Gel bildet, wird das Material teilweise undurchsichtig:Geben Sie hier die Bildbeschreibung ein

Dieses Phänomen wird NICHT in Acrylamidgelen beobachtet, die für die Elektrophorese von Proteinen verwendet werden. Unpolymerisiertes und polymerisiertes Acrylamid erscheinen beide klar.

Ich nehme an, dass wir hier Lichtstreuung beobachten. Ich bin mir nicht sicher, ob die Streuung Rayleigh oder Mie ist, und ich bin mir nicht sicher, warum sie bei der Bildung von Agarosegel auftritt. Ich bin mir nicht sicher, warum es bei Acrylamid, einem anderen Gel, nicht passiert.

Ich stimme Ihrer Vermutung zu, dass es höchstwahrscheinlich mit Lichtstreuung zu tun hat, aber warum die beiden Gele unterschiedlich aussehen würden, obwohl sie ungefähr ähnliche Porengrößen um 100 nm zu haben scheinen , ist unklar (verzeihen Sie das Wortspiel). Vielleicht liegt es an der Dichte der Poren?
Eine sehr populäre Referenz (für scheinbar eine Erklärung) scheint Doi E. 1993 zu sein. Gels and gelling of globular proteines. Trends Food Sci Tech 4:1-5. Nur das Original finde ich noch nicht. Umsonst meine ich. Ansonsten: sciencedirect.com/science/article/pii/S0924224405800032

Antworten (1)

Agarose ist ein Polysaccharid, und wie alle Polysaccharide strotzt es vor polaren Hydroxylgruppen. Das bedeutet, dass die Agaroseketten sehr stark durch Wasserstoffbrückenbindungen miteinander interagieren. Wenn die Lösung auf eine Temperatur erhitzt wird, die hoch genug ist, um die Wasserstoffbrücken zu brechen (etwa 90–100 °C), dann verhalten sich die Agarosemoleküle ziemlich genau wie jedes andere lösliche Polymer, dh eine zufällig orientierte Kette ohne Fernordnung. In diesem Zustand ist die Agaroselösung klar.

Wenn jedoch die Temperatur sinkt und Wasserstoffbrückenbindungen zu bilden beginnen, paaren sich die Agarosemoleküle zu Doppelhelices, dann aggregieren diese Doppelhelices selbst mit anderen Doppelhelices, um dickere Fasern zu bilden. Eine Google-Suche fand dieses schöne Bild, das zeigt, was passiert:

Geben Sie hier die Bildbeschreibung ein

( Bild von dieser Seite )

Das Gel ist auf dieses Netzwerk von Superhelices zurückzuführen, die an ihren Enden verbunden sind. Für die Zwecke dieser Frage ist die entscheidende Tatsache jedoch, dass der Durchmesser der Superhelix-Bündel etwa 20 nm oder etwa die Hälfte bis ein Drittel der Wellenlänge des sichtbaren Lichts beträgt. Damit liegen sie an der oberen Größengrenze für die Rayleigh-Streuung bzw. am unteren Ende für die Mie-Streuung. So erhält man die üblichen Rayleigh-Effekte, z. B. sieht das Gel in reflektiertem Licht blau und in gestreutem Licht orange aus, aber man erhält auch eine leichte Milchigkeit, die mit der Mie-Streuung verbunden ist.