RNAi wurde nach dem Fire- und Mello-Experiment in C.elegans berühmt; es war jedoch zuvor beobachtet worden. In den 80er Jahren versuchte Jorgensen, die Pigmentierung von Petunienblüten zu erhöhen, indem er zusätzliche Kopien des Chalcone-Synthetase-Gens einführte, das für ein Enzym kodiert, das an der Anthocyanin-Synthese beteiligt ist.
Dieses Experiment führte jedoch zu einer posttranskriptionalen Gen-Stummschaltung (PTGS) durch einen Mechanismus, der damals noch nicht verstanden wurde und der als RNA-Interferenz bezeichnet wird.
Hier finden Sie möglicherweise weitere Informationen über das Experiment (einschließlich des Vektors, der zum Einführen des Gens verwendet wurde).
Ich weiß, wie RNAi auf dem klassischen Weg funktioniert; Ich verstand jedoch nicht, wie eine zusätzliche Kopie des Gens Gen-Silencing erzeugen konnte. Das Einführen von DNA-Sequenzen wurde verwendet, um Zielgene auszuschalten, jedoch sind diese Sequenzen im Allgemeinen so geplant, dass sie eine Haarnadel bilden, die von Dicer erkannt wird; wahrscheinlich hat der Forscher eine solche Sequenz nicht verwendet. Darüber hinaus werden exogene Gene häufig verwendet, ohne dass ungeplante RNAi entstehen.
Kennt jemand mehr Informationen darüber, was möglicherweise bei dem Experiment zur Herstellung von RNAi passiert ist?
Die Antwort finden Sie in den Folien, zu denen Sie einen Link bereitgestellt haben. Die entscheidende Tatsache ist, dass Craig & Andy sorgfältige Kontrollen durchführten, um zu zeigen, dass das Vorhandensein von dsRNA sowohl in der Sense-Kontrolle als auch in der experimentellen Antisense-Probe für den RNAi-vermittelten Knock-down verantwortlich war. Tatsächlich hat Ken Kemphues dies früher in einem Artikel in Nature gezeigt (die Kontrolle hat auch die Genexpression niedergeschlagen), aber den Mechanismus nicht weiterverfolgt.
Daher folgere ich, dass das in die Petunien eingeführte transgene Genexpressionskonstrukt auch zu dsRNA führen muss. Ich bin weniger vertraut mit den Folgen des Einbringens fremder DNA in eine Pflanzenzelle (z. B. wird eine einzelne Kopie integriert, mehrere Kopien?, wird sie extrachromosomal erhalten?)