Wie visualisiert man das ECM?

Insbesondere möchte ich mir die Veränderungen in der Produktion von HA (Hyaluronsäure) ansehen. Meistens sieht man nur Menschen, die die Zelloberfläche anfärben oder Zellen zur Fixierung und anschließenden Bildgebung aus der Kultur entnehmen. Weiß jemand, wie man die ECM (extrazelluläre Matrix) und Proteoglykane analysiert, die eine Zelle umgeben, wenn man sehen möchte, ob eine Erkrankung die Art und Weise verändert, wie eine Zelle ihre ECM umgestaltet? Ist das bei manchen fluoreszierenden Tags überhaupt möglich?

Können Sie einige dieser Akronyme definieren? Ich gehe davon aus, dass ECM extrazelluläre Matrix ist und HA Hyaluronsäure, aber ich könnte mich irren und Hyaluron falsch geschrieben haben.
Ja, Entschuldigung – ECM = extrazelluläre Matrix, HA = Hyaluronsäure. Ich weiß, dass eine typische Hämatoxylin- und Eosin-Färbung (H & E) negativ geladene Dinge wie HA aufnimmt, aber wie können Sie Zellen reparieren, ohne die ECM zu stören? Außerdem habe ich mich gefragt, ob es Methoden gibt, um die Zell-ECM-Produktion über Fluoreszenz oder eine andere Methode zu analysieren, die eine Sonde verwendet, die ich mit einem Mikroskop beobachten könnte.
Interessante Frage. Afaik ECM ist viel mehr als nur HA, es enthält auch Chondoitin und andere Glucoseamin-verwandte Stoffe. Einige von ihnen sind in der Lage, die Immunreaktion zu regulieren, zum Beispiel kann Chondroitinsulfat die TNFa-Produktion und damit die Entzündung durch Arthritis reduzieren.
naturebiotech.com.tw/Fluorescent%20ECM%20Proteins.pdf Ich denke, diese Studie verwendet das gleiche Zeug: figshare.com/articles/… es ist wahrscheinlich möglich, aber ich habe nie mit ECM gearbeitet.
Es muss einige Antikörper gegen ECM-Komponenten geben, die Sie für die immunhistochemische Markierung verwenden könnten.

Antworten (2)

Verschiedene Komponenten der ECM können unterschiedlich gefärbt werden, aber da Sie nach Hyaluronsäure (HA) gefragt haben, beschränke ich meine Antwort auf ihre Färbung.

Siehe dieses Papier. Sie verwenden Hyaluran Binding Protein (HABP) als spezifische Sonde für HA.

Da HA eine sehr einfache, konservierte Zusammensetzung hat und ubiquitär in allen Tieren exprimiert wird, die eine entwickelte Immunantwort haben, ist HA nicht immunogen. Daher gibt es keine Antikörper, die HA spezifisch erkennen, und traditionelle immunhistochemische Verfahren zum Nachweis von HA sind nicht möglich. Glücklicherweise wurde ein sehr spezifisches und fest bindendes Protein, das Hyaluronan-Bindungsprotein (HABP), das aus der HA-Bindungsdomäne mit dem Verknüpfungsmodul von Aggrecan zusammengesetzt ist, isoliert (Hascall und Heinegård 1974; Tengblad 1979) und als HA-Sonde adaptiert (Ripellino et al. 1985). HABP wird heute weit verbreitet zum spezifischen Nachweis von HA eingesetzt.

Biotin-markiertes HABP kann für IHC-basierte Visualisierungsverfahren verwendet werden.

Das Buch "Basic Histology" von Junqueira und Carneiro erkennt das Problem der histologischen Fixierung von Grundsubstanz an. Sie empfehlen die Gefriertrocknung in flüssigem Stickstoff und die anschließende Entfernung des Wassers durch Hochvakuum bei einer Temperatur von -30 °C, was zur Sublimation führt (Eis -> Dampf). Anschließend Fixierung der Probe mit einem unpolaren Lösungsmittel. Danach können Sie Beizen wie PAS technic verwenden.

Ich habe das noch nie gemacht, ich kopiere nur aus dem Buch. Wenn Sie bereits flüssigen Stickstoff, Hochvakuum und PAS in Ihrem Labor haben, ist dies möglicherweise billiger als HABP.

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