Ist es möglich, einen Zellaufschluss mit Lysepuffer mehrere Tage bei -20 Grad zu lagern und dann mit der Phenol-Chloroform-Isoamyl-Reinigung fortzufahren?
Sollte in Ordnung sein, aber wenn ich Sie wäre, würde ich ein paar Minuten mehr verschwenden und bis zur Ethanolfällung weitermachen (im schlimmsten Fall 15 Minuten Arbeit). Hier ist das Protokoll: https://www.thermofisher.com/pl/en/home/references/protocols/nucleic-acid-purification-and-analysis/dna-extraction-protocols/phenol-chloroform-extraction.html
Sie können es mehrere Tage bei -20 Grad lagern (die Inkubation über Nacht verlängern, das ist der zweite Schritt der Ethanolfällung) und Sie haben die Gewissheit, dass es in Ordnung bleibt. Tatsächlich sollte das Einfrieren in den meisten Puffern, egal ob Lysepuffer oder Extraktionspuffer, Nukleinsäuren nicht wesentlich schaden. Aus meiner persönlichen Erfahrung: Ich habe Pflanzenmaterial in Extraktionspuffer für die RNA-Isolierung (TRI-zol-Methode) einige Tage bei -80°C eingefroren und am Ende in den meisten Proben sehr hohe Konzentrationen erhalten. Mir wurde gesagt, dass das Einfrieren bei -20 die Qualität beeinträchtigen würde, aber RNA ist im Allgemeinen weniger stabil als DNA.
Wenn Sie wenig bis gar kein Material hatten, sollten Sie besser das Präzipitationsverfahren durchführen und es dann einfrieren. Wenn es sich um winzige Beträge handelt und/oder Sie mit sensiblen Dingen wie forensischen Beweisen arbeiten, ist die Durchführung des Verfahrens die vernünftigste Lösung.
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