Isoprenoiddiphosphat (IPP) ist ein wichtiger Metabolit, der Vorläufer vieler sekundärer Metaboliten wie Dolicholdiphosphat, Ubichinon, prenylierter Proteine und Carotinoid (nicht in Cerevisiae synthetisiert) ist.
Wie hoch ist die durchschnittliche IPP-Konzentration in Hefe pro Gramm?
Obwohl diese Informationen keine direkte Antwort auf Ihre Frage liefern, hoffe ich, dass sie den Grundstein dafür legen, was im Metabolic Engineering von IPP erreichbar ist. Es soll auch einen Ausgangspunkt für weiterführende Literaturrecherchen bieten.
Dies ist eine ziemlich neue Übersicht über das metabolische Engineering relevanter Wege in verschiedenen mikrobiellen Systemen, einschließlich Saccaharmoyes :
Ajikumar PK et al . (2008) Terpenoide: Möglichkeiten für die Biosynthese von Naturstoff-Medikamenten unter Verwendung künstlicher Mikroorganismen. Molekulare Pharmazie 5: 167–190
Die Rezension bezieht sich auf:
Ro, D. et al. (2006) Produktion des Antimalaria-Medikamentenvorläufers Artemisinsäure in gentechnisch veränderter Hefe. Natur 440, 940–943.
In dieser Arbeit führte die Einführung eines Pathway-spezifischen Gens zur Produktion von 4,4 mg L –1 Produkt. Diese wurde durch mehrere Manipulationen auf 153 mg L -1 erhöht, darunter:
Erhöhung des Flusses durch den Weg durch Expression einer modifizierten HMG-CoA-Reduktase
Verringerung des Flusses in die Sterolsynthese durch Herunterregulierung des ERG9- Gens kombiniert mit der Expression eines dominanten negativen Allels des Transkriptionsfaktors Upc2.
AKTUALISIEREN
Nachdem ich meine Antwort gepostet hatte, fand ich dieses Papier:
Huang, B. et al . (2011)Metabolite Target Analysis of Isoprenoid Pathway in Saccharomyces cerevisiae als Reaktion auf genetische Modifikation durch GC-SIM-MS gekoppelt mit Chemometrie. Metabolomik 7:134–146
Das Papier enthält eine detaillierte Diskussion der Methoden, auf die ich hier nicht eingehen werde.
Obwohl es keine IPP-Messungen gibt, präsentieren sie in Tabelle 7 dieses Ergebnis: Geranylpyrophosphat 32 ng ml –1 in einer 48-stündigen Kultur, A 600 ~ 2,3. ERG9- Unterbrechung erhöhte dies auf 56 ng ml –1
Soweit ich das beurteilen kann, werden diese Werte als ng ml -1 Originalkultur dargestellt. Unter Verwendung von 1 U OD600 entspricht 0,41 g Trockenzellen Liter−1. Hieraus errechne ich einen Wert für GPP von 34 µg g -1 Trockengewicht im Wildtyp-Stamm.