Eine Möglichkeit, eine Hefetransformation durchzuführen, besteht in der Verwendung von Lithiumacetat, einer einzelsträngigen Träger-DNA und PEG (1) . Ich habe mich gefragt, warum das Polyethylenglykol für die effiziente Umwandlung wichtig ist. Wie wirkt es sich auf die Aufnahme der Fremd-DNA aus? Yamakawa et al. (2) zeigten, dass PEG für die Wiederherstellung der Zellen unerlässlich ist, aber ich konnte nicht auf dieses Papier zugreifen, um mehr darüber zu lesen.
http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/26634.html
Ich habe diesen Link gefunden - er sagt "wir wissen es nicht wirklich". Es heißt, PEG bindet DNA, ich nehme an, dass es die Membran vor ihrer negativen Ladung schützt und die Internalisierung ermöglicht.
Ich würde vermuten, dass die amphipathische Natur von PEG, da es teilweise hydrophob ist, auch dazu beiträgt, die Membran weicher zu machen. Interessanterweise verringert sich die Effizienz des Verfahrens, wenn Sie die PEG-Konzentration über die Grenzen hinaus erhöhen.
Ich nehme an, es hat eine analoge Funktion in Ligationspuffern. Dort nimmt es offenbar einen großen Teil des Volumens ein und erhöht dadurch die Wahrscheinlichkeit einer Wechselwirkung zwischen DNA-Stücken.
In einem Transformationspuffer sollte es die Wahrscheinlichkeit erhöhen, dass DNA in eine Zelle gelangt. Leider war die einzige Referenz, die ich dazu gefunden habe, bei Bitesizebio: http://bitesizebio.com/20/5-dna-ligation-tips/
Benutzer1393
Benutzer3442
ktyagi