Ich versuche, ein zuverlässiges Gen-Kit zu finden, mit dem Sie Toxoplasma gondii schnell testen können. Ich bin mir nicht sicher, ob es existiert. Ich habe die Intuition, dass einige Tests, die in den 90er und 2000er Jahren mit dieser Art durchgeführt wurden, hohe falsch negative Ergebnisse hatten.
Welche Gene sollten Sie nachweisen, um Toxoplasma gondii in einem Genkit zu finden?
Alle Forschungen zu Speicheltests, die ich gefunden habe, beinhalten den Nachweis von Antikörpern, die, wie Sie vermutet haben, je nach Krankheitsprozess oder Vorhandensein einer Immunstörung (z. B. aufgrund von AIDS) falsch negative Ergebnisse liefern können. Wenn Sie also T. gondii -gDNA aus dem Speichel isolieren können, ist ein Gentest möglicherweise empfindlicher. Amato Neto et al. Bericht:
Bei 26 Patienten mit AIDS, darunter sechs mit tomographischen Anzeichen, die auf einen durch Toxoplasma gondii verursachten zerebralen Abszess hindeuteten, wurden bei der Verwendung des Maus-Inokulationsmodells keine Parasiten im Speichel gefunden. Diese Studie [suggeriert], dass die Suche nach Toxoplasma gondii im Speichel keine alternative Methode zur Diagnose von Toxoplasmose bei Patienten mit AIDS ist.
Der vielleicht schwierigste Aspekt bei der Generierung eines genbasierten Speicheltests besteht also darin, den Parasiten tatsächlich aus dem Speichel zu isolieren. Ich konnte keine anderen Isolationsversuche finden, aber meine Recherche war sehr kurz.
Bezüglich der nachzuweisenden Gene haben Studien mit menschlichen Blutproben herausgefunden, dass die PCR-Amplifikation von B1-Paralogen ein empfindliches und selektives Verfahren zum Nachweis von T. gondii bereitstellt . Burg et al . fanden heraus, dass es etwa 35 Kopien des B1-Gens in T. gondii gibt und stellen außerdem fest, dass:
Aufgrund seiner repetitiven Natur ist das B1-Gen ein attraktives Ziel zum Nachweis von T. gondii-Parasiten durch Amplifikation von B1-spezifischer DNA.
Sie waren in der Lage, das Gen aus rohem Zelllysat sowie aus gereinigten DNA-Proben, die ein Verhältnis von Parasit zu Leukozyten von 1:10.000 enthielten, zu amplifizieren und nachzuweisen. Außerdem konnten sie das Gen bei der Untersuchung anderer Organismen nicht nachweisen. Ho-Yen et al. versuchte später eine PCR-Amplifikation derselben Gene in menschlichem Blut von Patienten mit Verdacht auf Toxoplasmose und stellte fest, dass:
PCR kann zuverlässig auf menschliche Blutproben angewendet werden. Für ein Referenzlabor ist dies eine wertvolle Ergänzung seiner Palette diagnostischer Tests und bietet einen schnelleren Assay als Tierkulturen.
Joneset al. verglichen den Nachweis der B1-Gene mit den P30- und 18S-rRNA-Genen im Kammerwasser. Mit dem B1-Assay konnten sie 50 fg gDNA nachweisen, was einem einzelnen Parasiten entspricht. Sie kamen zu dem Schluss, dass:
Das B1-PCR-Protokoll scheint das empfindlichste Protokoll zum Nachweis von T. gondii-DNA zu sein und war erfolgreich bei der Identifizierung von T. gondii-DNA in Augenflüssigkeiten und Netzhautschnitten.
Shigeta