Was verursacht schiefe Leiterbanden auf einem Agarosegel?

Ich bin häufig auf ein Problem gestoßen, bei dem die Bänder meiner Leiter schief wurden. Was verursacht das?

Hier ein Beispiel: 0,7 % Agarosegel, 100 V, 60 Minuten. Bei 1% tritt das gleiche Problem auf. Ich habe 10 ul einer 20 ul PCR-Reaktion geladen.

Geben Sie hier die Bildbeschreibung ein

Wie Sie sehen können, ist das Problem nicht das Lächeln per se. Die Bahnen selbst sind ziemlich vertikal und gerade. Nur die Bänder selbst erscheinen verzerrt. Was könnte dieses Problem verursachen?

Die Leiter und der Weg daneben sehen überladen aus. Versuchen Sie, weniger zu verwenden. Verwenden Sie nach Möglichkeit auch nicht die Bahnen an den Seiten der Gele, sondern lassen Sie diese leer, wenn Sie können. Verwenden Sie den Puffer wieder? Möglicherweise müssen Sie es häufiger ersetzen.
0,2 u Filtern Sie die Lösungen, die Sie zur Herstellung Ihrer Gele verwenden, und überladen Sie das Gel nicht, dies ist überladen.
@user137 Warum empfehlen Sie, die Seitenspuren nicht zu benutzen?
@Chris Es könnte nur Zufall sein, aber es scheint, als würde ich eher ein Problem mit der Leiter bekommen, wenn ich sie in die Seitenlinie stelle. Vielleicht sind es nur die Elektroden in meiner Gelbox, oder vielleicht war es ein Problem mit meinen frühen Gelen, bevor ich wusste, dass ich die Bahnen nicht überladen sollte, aber ich vermeide die Seitenbahnen, wenn möglich, und hatte weniger Probleme.
Ich habe dieses Problem noch nie gesehen, wenn die Gelbox in Ordnung war. Boxen, bei denen mehrere Gele komisch liefen, hatten meistens Probleme mit der Verkabelung der Elektroden.
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Antworten (1)

Befindet sich die Leiter an einer Kante des Gels, kann es sich um einen Prozess unterschiedlicher Dichte handeln, der darauf zurückzuführen ist, wie das Gel abgekühlt ist (oder zu langsam gegossen wurde). Ich habe mehr DNA in ein Gel geladen und es verursacht diese Art von Verzerrung bei mir nicht. Es kann sein, dass der Puffer der Leiter sich von dem unterscheidet, der zur Herstellung des Gels verwendet wird. Ihre Bänder sehen nicht besonders scharf aus, daher würde ich vermuten, dass die Betriebsspannung zu hoch ist und die Oberfläche des Gels sich erwärmt und daher die Bänder "verschmiert". Versuchen Sie, die Spannung für eine proportional längere Zeit bei 75 V zu betreiben, um zu sehen, ob dies Ihr Problem löst.

Was verursacht schiefe Leiterbanden auf einem Agarosegel?
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