Wie exprimieren und erkennen Sie GLP-1-Rezeptoren?

Die Frage ist etwas unklar, da sie nicht klären kann, ob der GPL-1-Rezeptor endogen ist oder überexprimiert wird. Gehört das GLP-1 auch zu derselben Spezies, aus der Min-6 stammt, oder gehört es zu einer anderen Spezies? Das sind wichtige Punkte, denn wenn der Rezeptor endogen ist, dann ist das Hauptproblem die Empfindlichkeit des Nachweisverfahrens, das manchmal schwierig sein kann, ein endogenes Protein relativ zu einem überexprimierten nachzuweisen. Auch wenn das GPL-1 zu einer anderen Spezies gehört, die Sie in Min-6 zu überexprimieren versuchen, funktioniert es möglicherweise nicht, da die zelluläre Maschinerie seine Produktion (obwohl unwahrscheinlich) oder seinen Transport zur Zelloberfläche möglicherweise nicht unterstützt, was ich hatte dieses problem schon mal. Es könnte sein, dass für die bestimmten Expressionsniveaus, die Sie in diesen Zellen haben, wenn das GLP-1 überexprimiert wird oder wenn es nicht endogen ist, es verursacht Toxizität und tötet die Zellen, die es exprimieren, weshalb Sie keine GLP-1-Expression sehen (z. B. aufgrund einer übermäßigen Rezeptoraktivierung). Könnten Sie auch klarstellen, was Sie mit "analog für glp-1" meinen? Bedeutet dies, dass es nicht genau GPL-1 oder ein Homolog oder Ortholog ist, das Sie mit einem GLP-1-spezifischen Antikörper nachweisen möchten? Dies könnte wiederum ein Problem darstellen, wenn der von Ihnen verwendete GLP-1-Ab eine Region des Rezeptors erkennt, die in seinen Homologen nicht konserviert ist. die Sie mit einem GLP-1-spezifischen Antikörper nachzuweisen versuchen? Dies könnte wiederum ein Problem darstellen, wenn der von Ihnen verwendete GLP-1-Ab eine Region des Rezeptors erkennt, die in seinen Homologen nicht konserviert ist. die Sie mit einem GLP-1-spezifischen Antikörper nachzuweisen versuchen? Dies könnte wiederum ein Problem darstellen, wenn der von Ihnen verwendete GLP-1-Ab eine Region des Rezeptors erkennt, die in seinen Homologen nicht konserviert ist.

In Bezug auf Lösungen, wie in den Kommentaren aufgezeigt, ist der beste Weg, dies zu tun, die Verwendung eines polyklonalen Ab, der gegen einen großen Teil des fraglichen Peptids erhoben wird, wodurch Sie eine bessere Chance auf dessen Erkennung haben. Wenn dies nicht funktioniert hat, müssen Sie möglicherweise auf den GLP-1-mRNA-Nachweis mithilfe von RT-PCR oder qPCR zurückgreifen, für die Sie Primer basierend auf Ihrer GPL-1-Sequenz entwerfen müssten, für die Sie hier Hilfe erhalten .