Bindet GTP-γS (GTP gamma S) alle GTP-bindenden Proteine?
Armacino
Ich habe gerade einen Artikel gelesen : Rab10 GTPase reguliert ER-Dynamik und -Morphologie – Nature Cell Biology 15, 169–178 (2013) doi: 10.1038/ncb2647 . In diesem Artikel isolierten sie zunächst ER-Vesikel, um Rab-Proteine in ER zu identifizieren. Dann wurden sie gewaschen, um zytosolische Proteine zu entfernen. Nach dem Waschen wurden diese Vesikel durch Detergens solubilisiert. Dann wurde es auf eine GTP-Agarosesäule geladen (um GTP-bindende Proteine an die Säule zu binden). Im letzten Schritt wurden GTP-bindende Proteine mit GTP eluiert und durch SDS-PAGE analysiert.
Als Kontrolle (vor dem Laden auf die Säule) verwendeten sie GTP gamma S, weil es verhindert, dass GTP-bindende Proteine an die Säule binden. Als ich ihre Gestalt ansah; Auf der Kontrollspur gibt es viele Bands! Also bin ich verwirrt: (Wenn es verhindert, dass GTP-bindende Proteine an die Säule binden, warum gibt es nach dem Eluieren von der GTP-Agarosesäule Banden? Und was können diese Banden sein?)
Antworten (1)
Verrückter Wissenschaftler
Um diese Figur geht es in der Frage. Rechts das Kontrollexperiment mit GTP-γS, links ohne:
Die in beiden Experimenten sichtbaren Banden sind unspezifische Bindungen. Wenn GTP-γS ihre Anwesenheit nicht beeinflusst, kann der Mechanismus, durch den sie an die Säule binden, nicht spezifisch für die GTPase-Funktionalität sein.
Die von den Autoren gesuchten Proteine sind diejenigen, die im Experiment ohne GTP-γS vorhanden sind, aber im Experiment mit GTP-γS nicht eluiert werden. Diese binden über eine GTPase-Funktionalität an das GTP auf der Säule. Sie sind in der Abbildung mit Pfeilspitzen gekennzeichnet.
Die allgemeine Idee hinter diesem Kontrollexperiment besteht darin, die spezifische Bindung von der unspezifischen Bindung an die Säule zu unterscheiden. Das bedeutet, dass die Autoren weniger Proteine hatten, die sie weiter untersuchen mussten, was ihnen einige Arbeit erspart.
Was ist der Unterschied zwischen Integrin und Cadherin?
Wie erfüllt der Golgi-Apparat seine Funktion?
Wie unterscheiden sich SDS-PAGE-Gele in einem Bis-Tris-System von einem Tris-Glycin-System?
Hilfe bei der Analyse von SDS-Page-Gel
Wie lange dauern die einzelnen Stadien der Meiose?
Elektroden in nichtleitender Flüssigkeit? Sind sie neutral? Elektrolyse, Elektrophorese
Ändern sich Zellen in Größe oder Masse, wenn Säugetiere wachsen?
Was bestimmt, ob das mütterliche oder das väterliche Allel exprimiert wird?
Wie wandern Proteine in MES vs. MOPS?
Methoden der Kerntransfektion - Kerntransport
MattDMo
Armacino
MattDMo
Niko
Armacino