Gibt es Methoden zur Quantifizierung von H2O2 (Wasserstoffperoxid), die nicht auf Meerrettichperoxidase beruhen?

Ich kann HRP nicht verwenden, da meine Substrate damit interferieren und ich eine Echtzeitmethode benötige, weil ich kinetische Parameter einiger Oxidasen messen möchte.

Mit Kaliumpermanganat titrieren? phs.prs.k12.nj.us/rcorell/LabREDOXAnalH2O2.pdf
Es tut mir leid, ich habe vergessen zu erwähnen, dass ich eine Echtzeitmethode brauche, weil ich kinetische Parameter für Oxidasen messen muss.

Antworten (3)

Der amperometrische Nachweis von H2O2 kann ohne HRP durchgeführt werden und liefert hochauflösende Echtzeit-Messwerte.

In der Literatur finden Sie viele verschiedene Arten von Elektroden, die zum Nachweis von H2O2 verwendet werden, darunter beispielsweise MnO2-beschichtete Kohlenstoffpasten-Mikroelektroden oder Goldelektroden, die mit Cytochrom c derivatisiert sind .

Es gibt auch kommerzielle Elektroden. Zum Beispiel basieren diese von WPI auf derivatisierten Kohlenstofffasern (obwohl sie nicht spezifizieren, womit, also würde ich HRP nicht ausschließen ...)

Eine weitere Möglichkeit ist die Verwendung des H2O2-empfindlichen Farbstoffs H2DCF (Dihydro-Dichlorfluorescein).

Dank Ihres Vorschlags (H2DCF) habe ich mich genauer damit befasst und mehrere andere Optionen gefunden: Dihydrocalcein AM, Dihydrorhodamine, Dihydroethidium und Europium-Tetracyclin. Alle von ihnen scheinen kein anderes Enzym zu benötigen. Irgendwelche Erfahrungen mit einem von diesen?
Nein, tut mir leid, ich habe das tatsächlich gefunden, als ich nach amperometrischer Erkennung gesucht habe, und ich dachte, ich würde es als weitere Option hinzufügen. Was ich anfangen und überprüfen würde, ist ihre Spezifität. Ich habe den Eindruck, dass es sich eher um ROS-Detektoren als um H2O2-Detektoren handelt, aber ich kann mich irren.

Bei einem rein chemischen Assay reagiert Mangandioxid (MnO2) aus Wasserstoffperoxid zu Sauerstoff , der spektroskopisch oder mittels direkter chemischer Analyse nachgewiesen werden kann.

Ich denke, der enzymatische Assay ist weniger umweltbelastend und liefert direkt kolorometrische Ergebnisse, weshalb er wahrscheinlich allgegenwärtig ist.

Um die kinetischen Parameter von Oxidasen zu messen, könnte man auch die direkte Messung der Sauerstoffkonzentration in Betracht ziehen. Sauerstoffsensoren sind viel häufiger als H2O2-Sensoren, und ich weiß, dass kleine Aufbauten (1-ml-Proben) basierend auf einer Sonde auf Fluoreszenzfarbstoffbasis erhältlich sind.

Können Sie mir bitte mehr über diese fluoreszierende Farbstoffsonde zur Sauerstoffmessung erzählen?
Gibt es Methoden zur Quantifizierung von H2O2 (Wasserstoffperoxid), die nicht auf Meerrettichperoxidase beruhen?
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