Michaelis-Menten-Gleichung; Wie findet man die Konstanten aus experimentellen Ergebnissen der Enzymaktivität?

Ich habe mich gefragt, was die Konstanten in der Michaelis-Menten-Gleichung tatsächlich in experimentellen Daten von Enzymen bedeuten. Wie verarbeite ich die Daten, um Km und Kcat zu finden?

Ich habe ein Experiment über Katalase und ihren Abbau von Wasserstoffperoxid durchgeführt. Ich habe einen Gasdrucksensor verwendet, um zu verfolgen, wie viel O2 im Laufe der Zeit aus der Reaktion produziert wurde. Das Folgende ist ein Beispiel-Rohdiagramm dessen, was ich gefunden habe. Punkt 0 ist, wenn ich das Substrat einsetze und die Reaktion gestartet wird (also denke ich, ich kann dies die "maximale Menge an Substratkonzentration" nennen - im Michaelis-Menten-Diagramm sollte es ganz rechts sein.)

Rohe Handlung

Um die Geschwindigkeit der Reaktion an jedem Punkt zu finden, dachte ich daran, die Steigungen zwischen jedem Punkt zu finden, was im Grunde dem Finden der Ableitung entspricht. Da das Rohdiagramm, das ich gefunden habe, wie eine Logarithmusfunktion aussieht, würde ich vorhersagen, dass die Ableitung wie eine Hyperbel aussehen würde (mit x > 0). Tatsächlich ist dies der (rohe) Graph der "Ableitung" des vorherigen Plots, der wie eine Hyperbel aussieht:

Derivat

Ich glaube, dass Kmax der y-Wert des ersten Punktes in diesem Diagramm ist – die Anfangsgeschwindigkeit, wenn das Substrat mit dem Enzym gemischt wird. Die Substratkonzentration ist zum Zeitpunkt 0 am höchsten, und die Substratkonzentration nimmt mit zunehmender Zeit ab.

Also dachte ich, um das Michaelis-Menten-Diagramm zu erstellen, sollte ich die x-Achse umdrehen, sodass die Substratkonzentration entlang der x-Achse zunimmt. Mein Problem war jedoch, dass, wenn ich dies tue, der Graph am Ende nicht wie die Michaelis-Kurve aussieht ...

Umgedreht

Was ich hätte finden wollen, ist die Michaelis-Menten-Kurve, damit ich auch die Km- und Kcat-Werte ableiten kann. Weiß jemand, wie das geht? Oder mache ich meine Schritte falsch? Vielen Dank, dass Sie mir geholfen haben!

Michaelis-Menten-Kurve:

Michaelis-Menten-Kurve

Antworten (1)

Haben Sie Daten für verschiedene Konzentrationen von Wasserstoffperoxid?

In diesem Fall sollten Sie einen Zeitpunkt wählen, der auf den linearen Teil Ihres Zeitdiagramms fällt. Und zeichnen Sie die Rate zu diesem Zeitpunkt für jede Substratkonzentration auf.

Dadurch erhalten Sie eine MM-Kurve, mit der Sie die gewünschten Werte berechnen können. Sie können sie nicht nur mit Ihren angegebenen Zeitdaten berechnen.

Nein, leider nicht. Deshalb habe ich mich gefragt, ob ich mit meinen Daten MM-Berechnungen durchführen könnte. Ich denke, das kann ich dann nicht (es sei denn, ich gehe davon aus, dass die Substratkonzentration mit der Zeit linear abnimmt - das einzige, was ich weiß, ist, wie viel H2O2 ich zu Beginn eingefüllt habe). Vielen Dank trotzdem für deine Antwort!
@lia Der Punkt ist, dass Sie dieses Experiment mehrmals mit mehreren unterschiedlichen Ausgangskonzentrationen von ausführen müssen H 2 Ö 2 , finden Sie die anfängliche (lineare) Rate für jeden und zeichnen Sie dann die Rate gegen die Ausgangskonzentration auf. Das ist, was diese Antwort versucht, Ihnen zu sagen.
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