Problem beim Einfügen des interessierenden Gens in das offene Plasmid, wenn ihre Längen nicht gleich sind

Aufgrund Ihrer Frage vermute ich, dass Sie an DNA als ein sehr starres Molekül denken – das ist es nicht.

Doppelsträngige DNA ist ziemlich flexibel, und ein nützliches mentales Modell wäre, sich dies so vorzustellen, als würde man die Enden von zwei dünnen Drahtstücken zusammenbinden, um einen Kreis zu bilden.

Doppelsträngige DNA kann geschlossene Kreise bilden, die kleiner als 250 bp lang sind ^1,2 und ich glaube nicht, dass es eine bekannte Obergrenze gibt – zum Beispiel gibt es ein bekanntes kreisförmiges Bakterienchromosom mit einer Länge von 14.782.125 bp ³ .

Ein typisches Plasmid kann Inserts jeder Größe bis zu einer Gesamtgröße von etwa 50 kb aufnehmen, aber Plasmide, die mehr als 20 kb groß sind, sind sehr schwierig zu handhaben und können spezielle Transformationstechniken erfordern.

Verweise:

1: Thibault, Thomas et al. „Produktion von DNA-Minikreisen mit weniger als 250 Basenpaaren durch einen neuartigen konzentrierten DNA-Zirkularisierungsassay, der das Design von Minikreisen mit NF-κB-Inhibitionsaktivität ermöglicht.“ Nucleic acid research vol. 45,5 (2017): e26. doi:10.1093/nar/gkw1034

2: Shore, David, Jörg Langowski und Robert L. Baldwin. "DNA-Flexibilität wurde durch kovalenten Verschluss kurzer Fragmente zu Kreisen untersucht." Proceedings of the National Academy of Sciences 78.8 (1981): 4833-4837

3: Land, Miriam et al. „Erkenntnisse aus 20 Jahren bakterieller Genomsequenzierung.“ Funktionelle & integrative Genomik vol. 15,2 (2015): 141-61. doi:10.1007/s10142-015-0433-4