In einer Studie werden drei Proteine A, B und C mit gleichem Molekulargewicht untersucht. Sie enthalten jeweils sechs, vier und vier Cysteinreste. Nur die Proteine A und B wurden mit β-Mercaptoethanol (das die Disulfidbindung reduziert) behandelt und einige Minuten in einem siedenden Wasserbad erhitzt. Was wird beim SDS-PAGE-Geldurchlauf erwartet?
A. Protein C bewegt sich am schnellsten.
B. Protein B bewegt sich am schnellsten.
C. Die Proteine A und B bewegen sich mit der gleichen Geschwindigkeit, aber schneller als C.
D. Die Proteine B und C bewegen sich mit der gleichen Geschwindigkeit.
Bevor ich die Antwort kannte, dachte ich, die Antwort wäre b. Denn als Protein A hat das meiste keine. von Aminosäuren, also wird es sicher hinter Protein B und C liegen. Und für Protein B und C, da Protein B in einer reduzierenden Umgebung war, wird es keine Disulfidbrücken bilden, aber Protein C wird es tun, also wird es Billore sein und daher hinter Protein B liegen. B wird also am schnellsten sein?
Aber der Antwortschlüssel sagt C, ich bin mir nicht sicher, wie?
Die Antwort ist also C. Bevor ich die Antwort kannte, dachte ich, die Antwort wäre b. Denn als Protein A hat das meiste keine. von Aminosäuren, also wird es sicher hinter Protein B und C liegen. Und für Protein b und c, da Protein B in einer reduzierenden Umgebung war, wird es keine Disulfidbrücken bilden, aber Protein C wird es tun, also wird es Billore sein und wird daher hinter Protein B sein. Also wird B am schnellsten sein? Aber der Antwortschlüssel sagt C
Die Problemstellung besagt, dass alle Proteine das gleiche Molekulargewicht haben, sagt aber nicht, wie viele Aminosäuren sie haben. Es sagt zwar aus, wie viele Cystein-Aminosäuren jede hat, aber nicht, wie viele andere Arten sie haben. Cystein bildet Disulfidbindungen, die Biegungen in der Proteinstruktur halten .
SDS ist ein Detergens, das im SDS-PAGE-Probenpuffer vorhanden ist, wo es zusammen mit etwas Kochen und einem Reduktionsmittel (normalerweise DTT oder B-ME zum Abbau von Protein-Protein-Disulfidbindungen) die Tertiärstruktur von zerstört Proteine. Dadurch werden die gefalteten Proteine zu linearen Molekülen. SDS überzieht das Protein auch mit einer einheitlichen negativen Ladung, die die intrinsischen Ladungen der R-Gruppen maskiert.
Der Sinn von SDS-PAGE besteht also darin, Proteine gemäß dem Molekulargewicht im Gel wandern zu lassen, ohne Rücksicht auf die natürlichen Ladungen, die von den verschiedenen Aminosäurekomponenten getragen werden. Die drei Proteine sollten daher in SDS-PAGE mit denselben Geschwindigkeiten wandern (nicht A ist langsamer als B und C, wie OP dachte).
Protein C wird jedoch nicht mit β-Mercaptoethanol (B-ME) behandelt, das ein wichtiger Bestandteil der SDS-PAGE ist, so dass es die Disulfid-Vernetzungen beibehält und somit keine lineare Kette von Aminosäuren ist. Daher wandert C langsamer als A und B, und das erwartete Ergebnis ist wie in Auswahl (c.) angegeben.
Nicolai
Ravleen Kaur
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