Warum ist es empfehlenswert, Western Blot-Proben paarweise vorzubereiten, wenn Sie zwei Versuchsgruppen haben?

Ich habe einige Western Blots durchgeführt, bei denen ich die Expressionsniveaus eines bestimmten Proteins in Gehirnhomogenaten von Wildtyp- und Knockout-Mäusen analysiert habe. Bei der Herstellung von Gehirnhomogenaten wurde mir geraten, sie paarweise herzustellen, so dass am selben Tag zwei Gehirnhomogenate hergestellt wurden, eines von einer Wildtyp-Maus und das andere von einer Knockout-Maus.

Ich weiß, dass die Paaranalyse nützlich ist, um Unterschiede auf dem Blot zwischen Proben aus zwei Versuchsgruppen visuell zu vergleichen. Ich habe mich jedoch gefragt, ob es neben dem einfachen visuellen Vergleich noch andere Vorteile (z. B. für die statistische Analyse) gibt, Proben paarweise für eine Western-Blot-Analyse vorzubereiten? Jeder Einblick wird geschätzt.

Antworten (1)

Dieser Punkt gilt nicht nur für Western Blot, sondern für alle Fall-Kontroll-Studien: Wenn das Präparationsverfahren eine Variabilität aufweist, wird diese Variabilität reduziert, wenn die beiden Proben gleichzeitig präpariert werden. Dies ist vielleicht einfacher zu verstehen, wenn man eine Analogie verwendet: Wenn in einen Toaster zwei Toasts passen, die Toastzeit jedoch unterschiedlich ist, werden die Toasts, die zusammen im Toaster waren, wahrscheinlich auf die gleiche Stufe gekocht / verbrannt.

Statistisch nutzt man den vollen Vorteil solcher Verbesserungen, wenn man statistische Techniken verwendet, die speziell für gepaarte Daten entwickelt wurden , wie z. B. den gepaarten Differenztest (siehe auch t-Test mit gepaarten Stichproben) . Aber auch ungepaarte statistische Methoden zeigen wahrscheinlich eine bessere Leistung (in Bezug auf die Identifizierung signifikanter Ergebnisse).