Berechnung der Proteinkonzentration aus Kiloeinheiten (KU)

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Einheitendefinition

Eine Einheit wandelt 1,0 μmol Phospho(enol)pyruvat pro Minute bei pH 7,6 bei 37 °C in Pyruvat um.

Die Einheit wird also durch die Aktivität definiert, und es gibt keine Möglichkeit zu wissen, wie viele Moleküle oder Milligramm Protein enthalten sind

Die Zahl von 350 - 600 Einheiten pro mg bezieht sich auf die spezifische Aktivität des Enzyms.

Die Einheit ist Internationale Einheit oder IU und wird normalerweise als die Enzymmenge definiert, die die Umwandlung von 1 Mikromol Substrat (oder Produkt) pro Minute unter definierten Testbedingungen (wie pH, Temperatur, Substratkonzentration, Anwesenheit von Mg) katalysiert ⁺⁺ usw.). Es ist somit ein Aktivitätsmaß .

Wenn das Enzym rein ist (keine anderen Fremdproteine ​​vorhanden), liefert die spezifische Aktivität wichtige Informationen über die katalytische Kapazität des Enzyms.

Sie wird in der Regel durch Messen errechnet

• die Aktivität der Enzympräparation unter definierten Testbedingungen
• die Proteinkonzentration desselben Enzympräparats (unter Verwendung von beispielsweise der Lowry- oder Biuret-Methode zur Proteinschätzung).
  
  Alternativ, wenn E(1%, 280) bekannt ist (siehe unten) und das Enzym rein ist , liefert die Messung der Extinktion bei 280 nm eine sehr gute Schätzung des Proteingehalts (und das Enzym kann „unversehrt“ wiedergewonnen werden Ende der Messung).

Wenn man also eine Zahl von 450 Einheiten/mg für die spezifische Aktivität von Pyruvatkinase annimmt, enthalten 25 KU (25 Kilo-Einheiten, nehme ich an) 500/9 mg (~55 mg) Protein.

Ich stelle fest, dass das Sigma-Produktblatt eine Zahl für E (0,1 %, 280) = 0,54 enthält.

Dies bedeutet, dass eine 1 mg/ml-Lösung des Proteins eine Extinktion bei 280 nm von 0,54 hat

E(0,1 %, 280) kann als sehr bequemes Maß für den Proteingehalt verwendet werden, vorausgesetzt, dass das von Sigma gelieferte Enzympräparat rein ist .

Eine „Faustregel“, die nützlich ist, wenn E(0,1 %, 280) unbekannt ist, besagt, dass eine 1 mg/ml Proteinlösung einen A ₂₈₀ von 1 hat.

Wenn also beispielsweise die A ₂₈₀ (Absorption bei 280 nm) des resuspendierten lyophilisierten Pulvers 1,08 beträgt und Sie 5 ml davon haben, beträgt die Proteinkonzentration 2 mg/ml und Sie haben insgesamt 10 mg Protein. Möglicherweise möchten Sie das Enzym selbst testen, um eine genaue spezifische Aktivität zu bestimmen.

Auch die EG-Nummer (Enzyme Commission) kann von Interesse sein. Für Pyruvatkinase (EC 2.7.1.40) siehe hier .

Eine großartige Referenz zu PK (PDF kann heruntergeladen werden) finden Sie hier (Ainsworth et al.)

Zu Ihrer zweiten Frage : Ich habe von zu Hause aus keinen Zugriff auf dieses Papier.

Wenn Calmodulin jedoch eine spezifische Aktivität von 40 000 Einheiten/mg hat,

• 25.000 Einheiten entsprechen 0,625 mg; dies ist in einem Volumen von 0,5 ml. Daher beträgt die Calmodulin-Konzentration 1,25 mg/ml.
• Wenn das Molekulargewicht von Calmodulin 16.000 beträgt, dann wären 16.000 mg/ml (theoretisch) eine 1-molare Lösung. Somit ist eine 1,25 mg/ml-Lösung etwa 78 Mikromolar.