IPTG und lac-Operator mit E. coli für Fremdgenfrage

Wir haben ein Experiment durchgeführt, bei dem wir E. coli mit einem Plasmid mit einem Gen aus einem anderen Bakterium darin hatten, und wir haben IPTG zur Induktion eingesetzt. Nachdem ich online mehr über IPTG nachgeschlagen habe, sehe ich, dass es mit dem Lac-Operator zusammenhängt, der sich nach dem, was ich gefunden habe, nur mit Laktose befasst. Gibt es eine andere Funktion, die hat? Wie kann dies mit dem zusammenhängen, was wir hineingeben und was wir tun? Hier fehlt mir der Anschluss.

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Das lac-Operon enthält Gene, die für die Verstoffwechselung von Lactose als Energiequelle wichtig sind – normalerweise wird dazu Glukose verwendet. Normalerweise ist das Operon streng reguliert und solange es eine andere Energiequelle gibt, wird es in einem gehemmten Zustand gehalten.

Das Vorhandensein von Lactose entfernt den lac-Repressor aus dem lac-Operon und ermöglicht die Expression der Gene und somit die Metabolisierung von Lactose. Der Mechanismus kann je nach Vorhandensein von Laktose ein- und ausgeschaltet werden.

IPTG ist eine Substanz, die das Vorhandensein von Allolactose (einem Metaboliten von Lactose) nachahmt und die Transkription des lac-Operons aktivieren kann. Da IPTG (im Gegensatz zu Allolactose) nicht durch β-Galactosidase hydrolysiert werden kann, bleibt seine Konzentration in der Zelle gleich. Mit dem lac-Operon und IPTG können Sie die Expression des Gens auf Ihrem Plasmid einschalten und die Überexpression starten.

Beeinflusst das Lac-Operon also andere Dinge als Laktose, die Einfluss auf unser Protein haben könnten? Oder gäbe es etwas im Plasmid, um es vom lac-Operator kontrollieren zu lassen? Hat das Vorhandensein oder Fehlen des Repressors eine Wirkung? Ich meine, was wir tun, hat nichts mit Laktose zu tun, also verstehe ich einfach nicht, wie sich das Herumspielen mit dem Lac-Repressor auf das auswirkt, was wir in die Zelle geben.
@ windy401 In Ihrem Plasmid (einem künstlichen Konstrukt) steht das interessierende Gen unter der Kontrolle des lac-Operators. Lac-Repressor kann konstitutiv von einem anderen Gen auf dem Plasmid exprimiert werden.
Endlich gefunden, und nachdem ich es und den Rest der Seiten gelesen habe ( mfa.od.ua/page274.htm ), verstehe ich es jetzt. „Das wesentliche Element, das an der lac-vermittelten Proteinexpression beteiligt ist, sind nicht die lac-Gene, sondern der lac-Regulationsapparat. Im Allgemeinen wird ein für die Überexpression ausgewähltes Gen in einen Plasmidvektor hinter dem lac-Promotor kloniert. Die Expression dieses Gens erfolgt dann unter lac-Kontrolle, entweder als unabhängiges Gen oder fusioniert an ein Fragment von lacZ oder anderen Genen." Ich habe einfach nicht gesehen, wie/warum unser Gen von etwas kontrolliert wurde, das nur Laktose kontrollierte.
Sie verwenden nur den Promotor des lac-Operons, entschuldigen Sie die Unklarheit hier. Dies ermöglicht die Kontrolle der Expression Ihres Zielgens. Ich werde die Antwort später bearbeiten.
IPTG und lac-Operator mit E. coli für Fremdgenfrage
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