In diesem Protokoll für die Präparation kompetenter E. coli-Zellen heißt es beispielsweise:
Platte 10 ul E. coli BL21 (DE3) Zellen auf einer LB-Agarplatte; über Nacht (12 Stunden) inkubieren.
Bereiten Sie 500 ml SOB-Medium vor, damit es am Vortag im 37-Grad-Inkubator vorgewärmt werden kann.
Wählen Sie eine einzelne ausgewählte Kolonie und inokulieren Sie in 5 ml SOB-Medium und wachsen Sie für 16 Stunden bei 37 Grad Celsius und 250 U / min in einem Schüttler.
500 ml vorgewärmtes SOB-Medium mit 5 ml der frischen Übernachtkultur impfen.
und dann befolge ich im Protokoll zur Überexpression von Proteinen nach der Transformation dieser Zellen grundsätzlich ähnliche Schritte wie oben, aber dieses Mal ohne Vorwärmen des flüssigen Inokulationsmediums im großen Maßstab. Warum ist das so?
Das liegt daran, dass E.coli BL21(DE3) kompetente Zellen sind. Die Kompetenz ist hier der Schlüssel, da die Zellen chemisch behandelt wurden, sodass die Transfektion durch Hitzeschock mit hoher Effizienz durchgeführt werden kann.
Dies bedeutet, dass diese Bakterien aufgrund der chemischen Behandlung ziemlich zerbrechlich sind und daher sowohl gegenüber mechanischen als auch thermischen Schocks sehr empfindlich sind.
Das Vorheizen des Mediums vermeidet einfach eine Beschädigung der Zellen und maximiert die Wachstumsrate.
MattDMo
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