Ich war ein Dummkopf und löste mein Antibiotikum (Kanamycin) in Tris-Puffer anstatt in H₂O auf. Das Kanamycin scheint immer noch aktiv zu sein, aber ein Kollege erwähnte, dass Tris an der Membrandurchlässigkeit von Zellen herumspielt. Ich war neugierig, inwieweit dies tatsächlich Experimente beeinflusst.
Der zitierte Artikel beschreibt Wirkungen von Tris auf die äußere Membran von E. coli . Wie alle Gram-Negativen hat E. coli eine innere (oder zytoplasmatische) Membran, die eine typische Phospholipid-Doppelschichtmembran ist, die viele Membranproteine einschließlich Transporter und natürlich eine Elektronentransportkette enthält. Um diese herum befindet sich eine Schicht aus Peptidoglycan, und dann ist die äußere Schicht der Zellhülle die äußere Membran, die eine spezielle (höchst atypische) Doppelschichtstruktur ist, die Phospholipide und Lipopolysaccharide sowie eine Reihe von Proteinen einschließlich der Porine enthält. Der Raum zwischen den beiden Membranen ist das Periplasma oder der periplasmatische Raum, der eine Anzahl kleiner sekretierter Proteine enthält.
Die äußere Membran ist anfällig für Störungen durch eine Reihe von Behandlungen, einschließlich EDTA-Behandlung. Zum Beispiel verwenden viele Zelllyseverfahren für E. coli EDTA, um die äußere Membran ausreichend aufzubrechen, damit Lysozym Zugang zum Peptidoglykan erhält.
Zellen mit destabilisierten Außenmembranen könnten eine erhöhte Zerbrechlichkeit aufweisen, aber im Allgemeinen würde ich mir vorstellen, dass dies normalerweise keine spezifischen Probleme verursachen würde: Dies würde natürlich davon abhängen, was genau Ihre Experimente sind.
Schließlich ist es erwähnenswert, dass die Konzentration von Tris, die Sie mit Ihrem Kanamycin hinzufügen werden, ziemlich niedrig sein muss. Selbst wenn Sie 0,1 M Tris verwendet haben, verwenden Sie vermutlich eine 1000-fache Stammlösung, sodass die Endkonzentration von Tris nur 0,1 mM beträgt. Die Arbeit in der zitierten Veröffentlichung betrachtete Zellen, die direkt in 0,1 M Tris resuspendiert wurden. Ich denke nicht, dass du dir darüber überhaupt Sorgen machen musst.
bobthejoe