Wie können Sie feststellen, ob eine Person für ein bestimmtes Allel homozygot ist?

Ich habe darüber nachgedacht, ein kleines privates Forschungsprojekt zu starten. In diesem Projekt muss ich herausfinden, ob eine Person für ein bestimmtes Allel homozygot ist. Der Grund dafür ist, dass ich wirklich versuche herauszufinden, ob er/sie eine Mutation hat, die dazu führt, dass er/sie dieses Chemokin nicht produziert. Daher muss ich auf einfache Weise feststellen, welche Menschen „normal“ sind, welche Menschen die Mutation in einem Chromosom haben und welche Menschen die Mutation in beiden haben. Etwa 1 % der Bevölkerung haben die Mutation in beiden Chromosomen.

Ein Primer würde AFAIK nicht in der Lage sein, zwischen heterozygoten und "normalen" Menschen zu unterscheiden.

Weiß jemand, wie man das angeht?

Sie könnten ein Testkreuz verwenden, aber das könnte kompliziert werden :)
Ich glaube nicht, dass ich Zeit habe, Menschen zu züchten ;)

Antworten (1)

Sie könnten eine 3-Primer-Strategie verwenden, bei der Sie einen gemeinsamen Primer haben, einen, der nur das mutierte Allel amplifiziert, und einen, der nur das wt amplifiziert. Dies kann je nach Art der Mutation machbar sein oder nicht. DNA von den Menschen amplifiziert beide Produkte, während homozygote nur eines (wt oder mutant) amplifizieren.

Natürlich ist es nicht unbedingt einfach, die Mutation eines Gens mit dem Fehlen eines Chemokins in Verbindung zu bringen.

Um ehrlich zu sein, würde ich jedoch einen anderen Ansatz wählen: Nehmen Sie Menschen, die das Chemokin nicht produzieren, und Menschen, die es tun (einfach durch Dosierung des Chemokins ins Blut). Sequenzieren Sie nun das Gen in den beiden Gruppen und suchen Sie nach Mutationen.

Ja, das ist ein kluger Ansatz. Aber ich glaube nicht (= weiß nicht ob), dass das nicht funktionierende Gen bei allen Individuen gleich aussehen wird. Da es sich um eine Missense/Nonsense-Mutation handelt, hat sie wahrscheinlich kein eindeutiges Merkmal. Wie auch immer, guter Punkt! +1
@Pedery: Nun, wäre die Sequenzierung in diesem Fall nicht die beste Strategie? Haben Sie irgendwelche Informationen über die Mutation oder ihr Produkt?
Nicht im Moment. Ich versuche gerade, mir einen Überblick zu verschaffen. Sequenzierung wäre nicht wirklich eine Option, weil ich daraus ein supereinfaches Testkit machen möchte, eines, das keine teuren Maschinen benötigt und ein Testergebnis aus einem bloßen Blutstropfen erhält. Aber in der Tat war Ihre Antwort hilfreich. Wenn ich keine besseren Antworten bekomme, markiere ich Ihre als akzeptiert.
Übrigens, was wäre der Zweck der gemeinsamen Grundierung? Wenn Sie die beiden anderen Primer haben, werden sie Ihnen trotzdem alle Informationen geben, die Sie brauchen, richtig?
Nein, Sie benötigen zwei Primer, um eine PCR-Amplifikation durchzuführen. Wenn Sie nur einen Primer haben, der auf das mutierte Allel geht, und einen, der auf das wt geht, haben Sie keine Möglichkeit, irgendetwas zu amplifizieren, da die beiden niemals an dieselbe DNA binden werden.
Ah, verstanden. Ich dachte an Sätze von zwei Primern pro Allel als einen Primer.
Wie können Sie feststellen, ob eine Person für ein bestimmtes Allel homozygot ist?
AntwortenHierDatenschutz-Bestimmungen1y, 0v