Haben Sie Erfahrung mit PacBio?

Ich bereite ein Experiment vor und ich fand P A C B ich Ö S M R T als die großartige Möglichkeit, meine PCR-Produkte zu sequenzieren. Ich finde die Kosten: Bibliotheksvorbereitung 655 Dollar + Sequenzierung 435 Dollar. Es scheint sehr niedrig. Haben Sie Erfahrung, wie viel Probe ich in einem Lauf sequenzieren kann (bei Abdeckung etwa 30) und ob es wirklich für diesen Preis ist?

Antworten (1)

Ob es eine gute Idee ist, PacBio zu verwenden, hängt stark davon ab, was Sie sequenzieren und was Sie mit den erhaltenen Daten tun möchten. Kurz gesagt: Sie erhalten längere Lesevorgänge, aber etwa 15 % Fehler pro Base. Das bedeutet, dass Sie mit diesen Fehlern fertig werden müssen, es gibt Möglichkeiten, dies zu tun. Wie viel Abdeckung Sie von Ihrem Sample erhalten, kann ich Ihnen nicht sagen, da ich nicht weiß, welche Art von Sample Sie sequenzieren möchten.

Wie viele Daten Sie aus einer SMRTcell herausholen, hängt auch von der Chemie ab, ich denke, es liegt derzeit zwischen 275 Mb und 375 Mb, je nach Chemie. Sie haben eine schöne Broschüre, die Sie sich ansehen können.

Auf jeden Fall müssen Sie sich wahrscheinlich von einem Bioinformatiker Ihrer Wahl beraten lassen, wie Sie Ihr Sequenzierungsexperiment entwerfen und analysieren.

Ich plane, Mausgene von MHC a TLRs (ca. 2000 bp) zu sequenzieren. Können Sie mir ein fiktives Beispiel dafür geben, wie viel Probe ich bei einer bestimmten Covarage einbeziehen kann?? Vielen Dank! ;)
Ich habe diese Berechnung noch nie für eine so kleine Probe mit PacBio durchgeführt. Um es kurz zu machen, von einer SMRT-Zelle erhalten Sie eine 30-fache Abdeckung des E. coli-Genoms (keine Fiktion, sie haben 3 Zellen bearbeitet und eine 100-fache Abdeckung erhalten). Ich denke, das ist ein bisschen zu groß für Ihre kurzen Proben. Trotzdem würde ich lieber keine "virtuellen" Berechnungen mehr darüber machen, Sie brauchen jemanden, mit dem Sie sprechen können, der Ihr Experiment versteht und wahrscheinlich mehr PacBio-Sequenzierung gesehen hat als ich.