Ist es möglich, jedes einzelne DNA-Stück durch PCR zu amplifizieren?

Gibt es eine Möglichkeit, eine unspezifische PCR-Amplifikation durchzuführen, um jedes vorhandene DNA-Stück zu amplifizieren?

Was ist die Quelle der DNA? Wenn geringfügige Abweichungen kein Problem darstellen, können Sie einfach mehr Gewebe-/Kulturvolumen zerkleinern, um mehr DNA zu extrahieren. Alle Zellen in Ihrem Körper und die meisten Zellen in Kulturen haben (fast) die gleiche DNA
Tatsächlich funktioniert RNAseq so. Eine Menge DNA wird aus RNA hergestellt, dann werden DNA-Fragmente an ihren Enden mit Adaptern (bekannte kurze Sequenzen) versehen, und dann werden diese DNA-Fragmente mit PCR amplifiziert
Ah danke, das war was ich gesucht habe.

Antworten (2)

Zusamenfassend; Theoretisch ja.

In der Praxis nein.

Unspezifische PCR erfordert zufällige Primer, die sich an eine Zielsequenz anlagern, um die Replikation während der PCR zu initiieren. Theoretisch sollte diese an jede Kombination von Basen anlagern und somit die Amplifikation aller DNA (oder zumindest in fragmentierter Form) ermöglichen.

Praktisch haben alle Primerkombinationen aufgrund der unterschiedlichen Basenzusammensetzung unterschiedliche Primer-Annealing-Temperaturen, was die Amplifikation der Fragmentierung inkonsistent und in anderen Fällen geradezu unmöglich macht.

Zusamenfassend; Theoretisch ja.

In der Praxis nein.

Ich stimme dieser Meinung zu.

Aber es gibt einige Methoden, dies zu tun. Ligieren beider Enden mit spezifischen Tags, um DNA-Fragmente mit dem Tag-spezifischen Primer-Set zu amplifizieren. Wenn Sie DNA-Fragmente unterschiedlicher Länge in der Originalprobe haben, könnten die PCR-Produkte verzerrt sein.

Ist es möglich, jedes einzelne DNA-Stück durch PCR zu amplifizieren?
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