Welche Bedeutung hat Harnstoff in der Massenspektrometrie? Wir verwenden 8 M Harnstoff, um unsere Proteine vor der Massenspektrometrie zu FASP. Welche Bedeutung hat die Verwendung von 8M Harnstoff? und wie wirkt es sich auf die proteine aus?
Ich denke, dass das OP nach der Relevanz der Verwendung von Harnstoff in Bezug auf die FASP-Methode gefragt hat. Beim FASP-Verfahren ist das primäre Denaturierungsmittel SDS. Proteine werden mit einer ~4%igen SDS-Lösung (gepuffert auf pH 7,5–8,0) denaturiert. Dann wird 8 M Harnstofflösung verwendet, um das SDS zu ersetzen. Harnstoff dient hier zwei Zwecken, erstens hält er das Protein denaturiert und in Lösungen, wenn SDS ersetzt/abgewaschen wird. Zweitens reduziert Harnstoff, da er ein chaotropes Mittel ist, die Größe von SDS-Mizellen, die andernfalls die Poren des Membranfilters blockieren würden.
Lesen Sie den Originalartikel hier: http://www.nature.com/nmeth/journal/v6/n5/abs/nmeth.1322.html
8M Harnstoff ist ein Vergällungsmittel, wie @Chris erwähnte. Die Denaturierung von Proteinen ist wichtig für die molekulare (auch bekannt als klassische) Massenspektrometrie. Wenn Sie ein nicht denaturiertes Protein analysieren, erhalten Sie nicht nur Informationen über die Primärstruktur, sondern auch über die nichtkovalente Wechselwirkung (2+°):
Der klassische MS-Ansatz, die sogenannte "molekulare MS", analysiert in der Gasphase des Massenspektrometers zunächst in Lösung vorliegende einzelne Spezies nach Zerstörung des nichtkovalenten Gerüsts. Andererseits zielt die „supramolekulare MS“ oder „nichtdenaturierende MS“ darauf ab, intakte nichtkovalente Komplexe, die bereits in Lösung existieren, in die Gasphase des Instruments zu überführen.
( Sanglier et al. 2008 , Methods Mol. Biol.)
Die Denaturierung von Proteinen ist wichtig für die molekulare/klassische Massenspektrometrie, da sie sicherstellt, dass Ihre Analyse nur die in Ihrem Zielprotein vorhandenen kovalenten Bindungen (Primärstruktur) widerspiegelt.
Chris
Kanadier