205 nm UV-Vis-Messwerte

Typischerweise bestimmen wir die Konzentration von Proteinen mit einer 280-nm-Messung. Es ist jedoch sinnvoll, 205 nm zu verwenden. Ich war neugierig auf die Wirksamkeit dieser Methode.

Welche Beweise haben Sie für die Angemessenheit des Lesens bei 205?
@MattDMo: Ich denke, das liegt daran, dass Nukleinsäuren normalerweise bei 260 gemessen werden. Ich bin mir jedoch nicht sicher, ob 205 das DNA-Hintergrundrauschen entfernen würde ... Dies sind ohnehin sehr ungefähre Quantifizierungen und geben nur eine allgemeine Vorstellung von der Proteinkonzentration.
@MattDMo, ich wollte die Frage nicht anführen, aber ich habe mir dieses Papier angesehen. Es gibt eine wissenschaftliche Grundlage für die Frage. onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/pro.2253/abstract

Antworten (1)

Dies könnte das sein, wonach Sie suchen. Die Umrechnungsformel lautet:

Proteinkonzentration (mg/ml) = ( Absorption bei 205 nm ) 31

Der erste, Scopes , weist darauf hin, dass Nukleinsäureverunreinigungen die 205-nm-Absorptionsmessungen verfälschen. Es scheint, als ob diese spektrophotometrische Berechnung für relativ reine Proteinspezies durchführbar ist.

Die DNA-Absorption scheint bei 205 so hoch zu sein wie bei 260. faculty.evansville.edu/be6/b4454/DNAspectrum.gif?dur=2225
Du scheinst Recht zu haben. Was nicht gezeigt ist, ist die relative Extinktion von Protein und Nucleinsäure bei 205 nm. NB: Ich habe die beiden Referenzen, die von dieser Seite, die ich gepostet habe, verlinkt sind, nicht weiterverfolgt.
Ich wollte betonen, dass A280 nm empfindlicher ist, da die Extinktion von Tryptophan am höchsten ist. So können Sie mit A280nm kleinste Konzentrationen nachweisen. Für Proteine ​​mit wenig bis keinen Aromaten oder für Proteine ​​mit atypischen Zusammensetzungen (und unbekannten Absorptionskoeffizienten) ist die Extinktion pro Peptidbindung allgemeiner. (Das ist es, was A205nm untersucht.) Aber wie andere gesagt haben, werden kontaminierende Nukleinsäuren auch bei dieser Wellenlänge absorbieren.
205 nm UV-Vis-Messwerte
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