Amplifikationstechnik für Proteine ​​ähnlich der PCR für DNA?

Ich weiß, dass PCR verwendet werden kann, um eine winzige DNA-Probe zu amplifizieren, um Experimente durchzuführen. Gibt es eine ähnliche Technik für eine Proteinprobe? Genauer gesagt bin ich nicht daran interessiert, das Protein zu "zerschneiden", sondern einfach mehr aus der ursprünglichen Probe zu machen.

Proteine ​​kann man nicht amplifizieren. Du musst nur mehr ausdrücken und/oder besser reinigen.
Sie können In-vitro-Translationskits verwenden, aber sie benötigen mRNA als Matrize und die Amplifikation ist nicht exponentiell wie bei der PCR. Es gibt keinen biologischen Mechanismus zur Synthese von Proteinen, die sich selbst als Matrize verwenden. Dies ist anders als die DNA und RNA.
Die PCR nutzt den Polymerase-Mechanismus, der aus einer Nukleinsäure-Matrize mehr Nukleinsäure aufbauen kann. Es gibt keinen solchen Mechanismus, durch den Protein aus einem Protein-Read hergestellt werden kann, da es wirklich das Ribosom ist, das Protein aus einer Nukleinsäure-Matrize produziert, richtig? Wie Canadianer feststellt, können Sie nur hoffen, mehr auszudrücken und es schön zu reinigen!
Ziehen Sie das Gen herunter, stellen Sie eine cDNA her und klonen Sie sie in einen induzierbaren Expressionsvektor mit hoher Kopienzahl. Transformieren Sie Bakterien oder Hefen und züchten Sie eine Kultur unter Selektion. Lassen Sie sie auf 10 ^ 10 oder mehr wachsen, dann induzieren Sie die Expression. Reinigen Sie viel, viel Protein. Wenn Sie das Gen nicht erhalten können, könnten Sie die sehr schwierige Aufgabe übernehmen, das gesamte Protein zu sequenzieren. Dann stellen Sie aus der Sequenz eine synthetische cDNA her und verwenden diese in Ihrem Expressionsvektor. Um das zentrale Dogma kommt man nicht herum; DNA<->RNA->Protein

Antworten (3)

Es gibt keine Technik mit einer Ausnahme. PCR erzeugt DNA aus DNA, sodass Sie Zyklen erstellen können. Für die Proteinsynthese ist eine mRNA eine Vorlage zur Herstellung von Proteinen. Höchstwahrscheinlich würden Proteine, an denen Sie interessiert sind, keine mRNAs synthetisieren, sodass Sie keine Zyklen etablieren können.

Die Ausnahme, die ich bereits erwähnt habe, ist Protein Misfolding Cyclic Amplification (PMCA) . Einige krankheitsassoziierte fehlgefaltete Proteine ​​können eine Fehlfaltung desselben Polypeptids induzieren, das nicht fehlgefaltet ist. So können Sie Zyklen der Fehlfaltungsreaktion etablieren.

PS:

Es gibt Techniken, um Proteine ​​aus DNAs oder RNAs zu synthetisieren, aber sie sind keine Kettenreaktionen. https://www.promega.com/products/protein-expression/eukaryotic-cell-free-protein-expression/ https://www.neb.com/products/e6800-purexpress-invitro-protein-synthesis-kit

Es ist unmöglich, Protein wie PCR zu amplifizieren. DNA und RNA können einer PCR unterzogen werden, da die Basenpaare komplementär sind: AT CG AU. Aber Aminosäuren sind nicht komplementär; Können Sie eine Aminosäure finden, die zu Glycin passt? Außerdem sind Proteine ​​nicht nur eine einzelne Polypeptidkette wie DNA, Proteine ​​müssen gefaltet werden, nachdem die Polypeptidkette synthetisiert wurde. Normalerweise benötigt ein Proteinmolekül mehr als eine Polypeptidkette, um sich zu einem Proteinmolekül zu verbinden. Es kann nicht passieren, dass es als PCR funktioniert.

Ich würde sagen, unmöglich ist eine Strecke. Ein erfinderischer Biochemiker könnte Moleküle erzeugen, die zu jeder Aminosäure „komplementär“ sind, ähnlich einer DNA-Polymerase. Dann wäre ein Protein erforderlich, um diese Ähnlichkeit sowohl zu erkennen als auch in eine Proteinverlängerung zu übersetzen. Unwahrscheinlich, verdammt ja, unmöglich, nein.

-1. Es gibt buchstäblich keinen bekannten Mechanismus, durch den dies durchgeführt werden kann. Das De-novo -Design funktioneller Proteine ​​liegt außerhalb der Reichweite der modernen Biochemie.
Selbst wenn Ihnen dieser Prozess gelingt, ist das Protein immer noch linear oder schlechter.
Es gibt mehrere Mechanismen zum Testen dieser Methodik. Warum sollte jemand diesen Prozess de novo initiieren? Evolution sowohl in der Natur als auch im Labor geht von einer bereits bestehenden Vorlage aus. Und alle Proteine ​​sind von vornherein linear.
Amplifikationstechnik für Proteine ​​ähnlich der PCR für DNA?
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