Ich verwende eine Methode, um alle Aminosäuren in einer Lebensmittelprobe zu analysieren. Dazu muss ich die Probe hydrolysieren und im letzten Schritt der Methode lese ich die Aminosäuren mit einer Ionenaustauschchromatographie aus. Bei dieser Methode wandelt sich das Glutamin jedoch aufgrund der Hydrolyse in Glutaminsäure um, daher erhalte ich in meinem Ergebnis einen großen Peak für Glutaminsäure und kann Glutamin nicht ablesen.
Meine Frage ist, ob es eine Methode gibt, Glutamin in einer Lebensmittelprobe zu quantifizieren.
Edit: Es ist eine Weile her, danke für das Feedback! In der Art von Proben, die ich habe, muss ich das gebundene Glutamin messen, nicht das freie Glutamin. Dies stellt ein Problem während der Probenvorbereitung dar, wenn versucht wird, die Aminosäuren zu trennen. Ich habe ein paar Experimente gemacht und es ist mir fast gelungen, einen „Enzymcocktail“ zu verwenden, der eine vollständige enzymatische Hydrolyse durchführt. Der nächste Schritt wird sein, herauszufinden, ob ich Glutamin quantifizieren kann.
Ich bin mit enzymatischen Kits zur Quantifizierung von Glutamin nicht so vertraut, aber die meisten enzymbasierten Analysekits enthalten eine Reihe ziemlich starker Annahmen zur beteiligten Enzymologie, und meiner Erfahrung nach sind sie schwierig zuverlässig zu verwenden. Kommerzielle Kits sind hoffnungslos zu beheben, da ihre Komponenten nicht offengelegt werden – Sie wissen nicht, womit Sie arbeiten.
Sind Sie in einer Einrichtung für klinische Chemie? In diesem Fall haben Sie möglicherweise Zugang zu Analysatoren, die zur Messung biochemischer Blutparameter verwendet werden, und einige Modelle messen Glutamin, zum Beispiel dieses . Diese Instrumente basieren ebenfalls auf enzymatischen Assays, aber sie werden sorgfältig getestet, da sie in der Humanmedizin verwendet werden, und daher würde ich sie für zuverlässiger halten als das durchschnittliche Sigma-Kit.
Die beste Alternative ist meines Erachtens die Massenspektrometrie oder NMR. Glutamin ist mit jedem LC-MS- oder GC-MS-Setup einfach zu messen (ein alter Triple-Quadrupol reicht gut aus), es ionisiert gut im Elektrospray im positiven Modus, wird auf einer typischen HILIC-Säule gut zurückgehalten, und isotopenmarkierte Standards sind leicht erhältlich erhältlich. Ich bin kein Experte für NMR, aber ich weiß, dass Glutamin routinemäßig gemessen wird.
Ein weiterer Vorbehalt bei der Analyse von Glutamin ist, dass es sich in Wasser spontan zu Pyroglutamat zersetzt, mit einer Halbwertszeit von etwa zwei Wochen bei Raumtemperatur, wie in diesem Artikel gezeigt . Aber ich bin mir sicher, dass Sie sich dessen bewusst sind.
Alan Boyd
Benutzer137