Kann ich Trizol erhitzen?

Ich frage mich, ob ich das Trizol-Reagenz 30 Minuten lang auf 65 ° C erhitzen kann. Das Ziel ist es, den Protein-RNA-Komplex zu stören und gleichzeitig Nukleasen zu hemmen. (Ich kann RNasin nicht verwenden, weil es bei 65 ° C inaktiviert wird, und ich kann RVC nicht verwenden, da die Reaktion EDTA enthält). Mir ist klar, dass das Erhitzen von Trizol nicht sicher ist und seine Dämpfe gefährlich sind, aber ich kann es in der Abzugshaube durchführen.

Soweit ich weiß, stört Trizol Protein-RNA-Komplexe von selbst - überprüfen Sie das Protokoll. Auch Phenol, ein Hauptbestandteil, ist brennbar. Ich weiß nicht, was der Flammpunkt von Trizol ist, aber ich wäre äußerst vorsichtig. Dieses Protokoll behauptet, dass Sie es erhitzen können. Funktioniert Ihr Experiment bei RT nicht?
Heizung wird keine schöne Idee sein. Wenn Ihre Zellen jedoch zu lyseresistent sind, können Sie die Röhrchen in einem warmen Wasserbad aufbewahren. Bringen Sie es jedoch wieder auf RT, bevor Sie Chloroform hinzufügen. BTW, was ist das für eine Probe?
Wenn Sie sich Sorgen um die Sicherheit machen, wenden Sie sich an das Environmental Health and Safety Office Ihrer Universität (oder eine entsprechende Stelle). Sie können (sollten und werden) Sie in Sicherheitsfragen beraten.
Welche Art von Zellen oder Komplexen haben Sie? Ich habe viel mit Reagenzien auf Phenolbasis gearbeitet, aber nie Probleme damit bei Raumtemperatur zu arbeiten. Außerdem ist Phenol flüchtig, besonders bei höheren Temperaturen. Sie müssen dies in einem guten Abzug tun, sonst ist dies ein ernstes Gesundheitsproblem. Und auf jeden Fall abkühlen, bevor Sie Chloroform hinzufügen.

Antworten (1)

Das Arbeiten mit heißen Phenollösungen wird aufgrund der damit verbundenen Gefahren selten durchgeführt. Phenol muss ohnehin im Abzug gehandhabt werden, bei höheren Temperaturen wird es noch flüchtiger. Wenn Sie dies also vorhaben, tun Sie dies mit besonderer Sorgfalt, um Verletzungen zu vermeiden.

Es gibt ein Papier, das diese Methode für Bakterien beschreibt, aber das sollte auch für andere Proben funktionieren: „ Evaluierung von Isolierungsmethoden und RNA-Integrität für die bakterielle RNA-Quantifizierung “. Es gibt jedoch eine andere Methode, die zur Extraktion von RNA aus bakteriell infiziertem Pflanzenmaterial entwickelt wurde und ebenfalls einen Versuch wert ist (wenn auch möglicherweise einer Anpassung bedarf), die ohne heißes Phenol auskommt: „Eine optimierte Methode zur Extraktion bakterieller mRNA aus mit Escherichia coli O157:H7" infizierten Pflanzenwurzeln .

Was passiert also, wenn Sie Ihr Phenol:Chloroform nicht im Abzug aufbewahren? Weil ich nicht habe. Werde ich sterben? Ich berühre auch gelegentlich ein Gel, das Ethidium enthält. Soll ich mein Testament schreiben?
Sie sollten mit Phenol sehr vorsichtig sein, da dies zu unangenehmen und lang anhaltenden Verätzungen führt. Es zerstört im Grunde die Zellen, deshalb verwenden wir es zur Freisetzung der Nukleinsäuren. Inhalieren ist eine schlechte Idee. EtBr hingegen sollte mit Vorsicht behandelt werden, aber die meisten Ratgeber über die Gefahren werden überbewertet. Es ist mutagen (kann Mutationen verursachen) und teratogen (kann den sich entwickelnden Embryo schädigen), aber ich habe noch keinen Beweis dafür gesehen, dass es krebserzeugend ist (außer wenn es Mutationen verursacht). Anders ist dies beispielsweise bei Benzol, das direkt krebserregend ist.
Außerdem: EtBr hat eine sehr gute Wasserlöslichkeit (was bedeutet, dass es die Hautbarriere nicht so leicht passiert, insbesondere nicht als geladenes Molekül) und es ist lichtempfindlich. Verwenden Sie es also mit Vorsicht, aber überreagieren Sie nicht.
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