Optimierung von Signalpeptiden

Wir wollen das Signalpeptid eines Rezeptors in einer gängigen immortalisierten menschlichen Zelllinie verändern. Die Zelllinie exprimiert bereits eine ungewöhnlich hohe Menge des Proteins, aber ein Großteil davon wird nicht oberflächenexprimiert.

Als wir die Sequenz des Signalpeptids in der Zelllinie (in diesem speziellen Fall das erste 19AA) verglichen, fanden wir 2 Mutationen gegenüber der Wildtyp (WT)-Sequenz. Eine offensichtliche Idee, die wir tun werden, besteht darin, das Peptid in der WT-Version wiederherzustellen.

Aber ich war neugierig auf Optionen, die den Transport zur Plasmamembran über WT erhöhen. Wenn ich nach Gruppen gesucht habe, die dies tatsächlich getan haben, waren es normalerweise große Bildschirme gegen jede mögliche Mutation im Signalpeptid.

Gibt es gezielte Ansätze zur Auswahl einer kleinen Anzahl von Signalpeptiden, um die Oberflächenexpression zu erhöhen?

Ich spiele herum, indem ich einige virale Peptide austausche, die völlig unabhängig sind, um zu sehen, ob wir eine erhöhte Expression mit einem Rezeptor erreichen können, der noch (halb) funktionsfähig ist.

Gibt es Hinweise darauf, dass die Signalsequenz die Ursache für die fehlende Oberflächenexpression ist? Wissen Sie, wo sich der Rest des Proteins (nicht an der Oberfläche) tatsächlich befindet?
Von der Färbung her scheint es hauptsächlich diffus durch das Zytoplasma zu sein, nicht wirklich in Puncta, wie ich aufgrund von Fehlfaltung gedacht hätte. Wir wissen auch, dass das, was sich an der Oberfläche ausdrückt, funktional ist.
Außerdem interessiert mich der allgemeine Fall, wenn es einen gibt, Typ-I-Transmembranproteine, wenn ein Typ benötigt wird. Ich werde sagen, dass Sie an einer bestimmten Modifikation interessiert sind, selbst wenn es sich um ein Signalpeptid handelt, das nicht im Wirt gefunden wird (z. B. viral). Ich versuche, meine Tech-Transfer-Leute dazu zu bringen, dass ich nach dem spezifischen Protein frage.
Ich habe keine Antwort auf die Frage, aber ich interessiere mich für das Problem. Sehen die Mutationen so aus, als könnten sie die SP-Funktion beeinflussen? In der Zwischenzeit ist hier ein Artikel über allgemeine Designprinzipien, den Sie vielleicht noch nicht gesehen haben. Es ist alt, aber es ist von G von Heijne.
@AlanBoyd Jeder von Heijne ist unabhängig von der Anwendung lesenswert. Das war die Hauptquelle, die mich dazu veranlasste, die Frage zu stellen.
Außerdem ist die Mutation eine Serin-Mutation, also denke ich, dass sie wahrscheinlich Dinge verändert

Antworten (1)

Sie könnten die Transkription des Rezeptorgens, an dem Sie interessiert sind, hochregulieren. Mehr produzierte Rezeptoren = mehr Rezeptoren, die auf der Zelloberfläche exprimiert werden.

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