Mich interessiert, ob es eine Möglichkeit gibt, die Plasmid-DNA innerhalb einer E.Coli-Zelle gezielt so abzubauen, dass die Methode der chromosomalen DNA keinen Schaden zufügt. Zuerst dachte ich an Restriktionsendonucleasen, aber ich fürchte das;
Mein zweiter Gedanke war das CRISPR/Cas9-System, aber es klingt wie eine Überkomplikation des Problems. Irgendwelche einfacheren Ideen? (Für zB spezifische Enzyme)
BEARBEITEN: Die Hauptidee besteht darin, kompetentere E.Coli-Zellen mit gerichteter Evolution zu schaffen. Derzeit ist dies nur ein Gedankenexperiment, daher gibt es keine spezifische Plasmidsequenz. Im Detail; Ich würde das Plasmid in die Zellen transformieren, dann den Selektionsteil mit einem Antibiotikum durchführen und sie wachsen lassen, dann die Zellen in ein Medium überführen, in dem es kein Antibiotikum gibt, und IPTG hinzufügen, um das Plasmid-DNA-Hydrolase-Enzym zu induzieren, dann vielleicht ein Ein anderer Selektionsteil könnte durchgeführt werden, um die Zellen zu entfernen, die noch das Plasmid enthalten (z. B. mit FACS, wenn sich auf dem Plasmid ein GFP-Gen befindet), dann die Zellen mit CaCl2 wieder kompetent machen und diesen ganzen Vorgang immer wieder wiederholen.
Die herkömmliche Methode zur Entfernung eines Plasmids aus E. Coli besteht darin, die Zellen mit Etidiumbromid zu züchten.
VonBeche
Chris
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