Enzyme und Plasmide

Eine Oberschulklasse hat Plasmide mit Hilfe von Restriktionsenzymen und Elektrophorese analysiert.

Die Klasse erhielt zwei verschiedene Plasmide, pBR 322 und pC 508. Diese beiden Plasmide sollten durch EcoR I und Hind III geschnitten werden.

Abbildung 1 zeigt die beiden Plasmide mit Angabe der beiden Schnittpunkte für EcoR I und Hind III.

Weiterhin sind auch die Schnittpunkte für das Enzym Pst I dargestellt.

In Abbildung 2 sehen Sie das Ergebnis der Restriktionsanalyse.Geben Sie hier die Bildbeschreibung ein

Fragen:

1) Analysieren und erklären Sie die Ergebnisse in Abbildung 2

2) Welche DNA-Stücke würden entstehen, wenn Sie mit Pst I geschnitten hätten?

1) Sie können sehen, dass die Abbildung das Ergebnis der Restriktionsanalyse zeigt. Was das Plasmid pBR 322 betrifft, sehen Sie, dass das Ergebnis des Schneidens von Hind III und EcoR I darin besteht, dass beide Enzyme die gleiche Größe haben. Fig. 1 zeigt, dass Hind III über 0 Basen schneidet und EcoR I bei 0 Basen schneidet.

In pC508 sehen Sie, dass beide Enzyme zweimal geschnitten haben. EcoR Ich habe bei 1200 und 5800 Basen geschnitten, was Sie auf Abbildung 1 sehen können. Das Ergebnis davon können Sie auf Abbildung 2 (der Gelelektrophorese) sehen. Hind III schneidet bei 6400 und 1200 Basen, was wiederum eine Erklärung dafür ist, warum die DNA-Moleküle (Abbildung 2) unterschiedliche Größe haben.

2) Wenn Pst I stattdessen auf dem Plasmid pBR 322 verwendet würde, würde man die gleiche Größe wie Eco und Hind erhalten, weil sie alle eine Stelle schneiden. Wenn Sie PC508 eingeschnitten hätten, würden Sie die Basen 4800 und 6700 erhalten (wie Abbildung 1 zeigt).

Sind diese Fragen richtig beantwortet?

Antworten (1)

Ihre Schätzung der Größe der Fragmente für pC508 ist falsch.

Sehen Sie sich die Größe des Plasmids in der Mitte des Kreises an. Die Größe Ihrer Fragmente muss sich zu dieser Zahl addieren. Wenn Sie also sicher wären, dass ein Fragment 1000 bp hat, müsste das andere Fragment 6300 bp haben.

Sie sollten auch beachten, dass die Fragmentgrößen für EcoR1- und HindIII-Verdaus nicht gleich groß sein sollten.

Sie müssen auch etwas über die Art der DNA sagen, die Sie in den pBR322-Spuren haben. Ist es linear, kreisförmig, supergewickelt?

Bei Frage 2 ist Ihre Erklärung für pBR322 in Ordnung, Sie sollten dennoch die Art der DNA erwähnen, die Sie in diesen Bahnen haben.

Sie müssen nicht nur erklären, wo PSTI schneidet, sondern auch die Größe der Fragmente, die es produziert.

Eine Stelle, an der ein Restriktionsenzym schneidet, wird als Restriktionsstelle bezeichnet. Anstatt Schnitte an einer Stelle oder an zwei Stellen zu sagen, sollten Sie also an einer einzelnen Restriktionsstelle usw. sagen.

Danke, aber was meinen Sie mit: „Sie sollten auch beachten, dass die Fragmentgrößen für EcoR1- und HindIII-Verdauungen nicht gleich groß sein sollten.“ Sie müssen auch etwas über die Art der DNA sagen, die Sie in den pBR322-Spuren haben. Ist es linear, kreisförmig, supergewickelt?" Was 2) betrifft, ist es offensichtlich kreisförmig? aber vielleicht verstehe ich nicht, was du meinst?
Führen Sie die Mathematik durch, um die Länge jedes Fragments herauszufinden. Sehen Sie sich auch Ihr Gel für pC508-Aufschlüsse genau an. Haben diese Fragmente die gleiche Anzahl von Basenpaaren? Wie für '2)', wirklich? Was haben Sie mit dem pBR322-Plasmid gemacht, bevor Sie es auf das Gel geladen haben, und was macht das mit der DNA?
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