Gute Pipettiertechnik?

Eine gute Pipettiertechnik ist für viele Biologen unerlässlich, aber es kann schwierig sein, sie richtig hinzubekommen. Wenn ich 1 µl Flüssigkeit mit einer Mikropipette nehme, scheine ich immer weniger als 1 µl zu nehmen, und diese Menge ist variabel/inkonsistent. Ich würde gerne wissen, was falsch sein könnte.

Was ist die richtige Pipettiertechnik? Kann es sein, dass die Pipette ungenau ist?

Willkommen bei Biology.SE. Sie sollten versuchen, mehr Informationen über den Moment zu geben, in dem Sie feststellen, dass Sie nicht genau einen Mikroliter geleitet haben. Sehen Sie direkt in der Pipette, dass Sie nicht 1 Mikroliter pipettiert haben? Oder haben Sie mal etwas in der Pipette übrig und mal nicht. Glauben Sie, dass die von Ihnen verwendete Pipette die Ursache sein könnte?
Es würde mich nicht wundern, wenn Ihre Pipette gewartet werden müsste. Einige der für die Funktion wichtigen Teile (Gummiringe) nutzen sich ab und müssen von Zeit zu Zeit ersetzt werden.
Ich habe mein enges Votum zurückgezogen, eine gute Pipettiertechnik ist in vielen Bereichen der Biologie unerlässlich. Allgemeine Informationen zur Pipettiertechnik wären von Nutzen.
Dieser Beitrag kann zu einem Community-Wiki gemacht werden , aber ich überlasse diese Entscheidung dem OP und @rg255
Welche Pipette hast du verwendet? Eine 10-ml-Flasche wird Ihnen nicht helfen. Verwenden Sie den kleinsten, den Sie finden können. Auch wenn Sie eine einzige Pipette verwenden, um alle Lösungen zu kombinieren, und diese eine Pipette einen systematischen Fehler aufweist (dh Kalibrierung erforderlich, aber nicht durchgeführt), dann gibt es kein Problem, da es nur um relative Volumina geht. Wenn Sie mehrere Pipetten verwenden, um Flüssigkeiten zu einem Reaktionsgemisch zu kombinieren, treten Probleme auf.

Antworten (2)

Hier sind einige Schritt-für-Schritt-Anleitungen für eine gute Pipettiertechnik:

  1. Stellen Sie sicher, dass die Pipette auf das richtige Volumen eingestellt ist
  2. Stellen Sie sicher, dass die Spitze fest angebracht ist
  3. Halten Sie die Pipette beim Pipettieren senkrecht
  4. Drücken Sie den Kolben langsam und gleichmäßig bis zum richtigen Punkt (der ersten Stoppposition)
  5. Führen Sie die Spitze in die zu pipettierende Flüssigkeit ein. Stellen Sie sicher, dass die Spitze richtig in die Flüssigkeit eingetaucht ist, aber keine Oberflächen des Behälters berührt/naht
  6. Lassen Sie den Kolben langsam und gleichmäßig wieder los , halten Sie die Pipette aufrecht und die Spitze eingetaucht und stellen Sie sicher, dass sich keine Blasen bilden – Sie können versuchen, sie vorzunässen (siehe unten verlinktes Video, gegen 3:00 Uhr).
  7. Ziehen Sie die Pipette aus der Flüssigkeit
  8. Geben Sie die Flüssigkeit vorsichtig in den gewünschten Behälter ab, indem Sie den Kolben gleichmäßig bis zur zweiten Stoppposition (vollständig heruntergedrückt) drücken, und stellen Sie sicher, dass die gesamte Flüssigkeit ohne Verschütten oder Spritzer abgegeben wird .

„Spitze im 45-Grad-Winkel an die Gefäßwand ansetzen, dann bis zum ersten Anschlag nach unten drücken, dann bis zum zweiten Anschlag durchdrücken, Kolben gedrückt halten und Pipette herausziehen und prüfen, ob der Tropfen im Behälter ist Behälter und Pipettenspitze ist leer" - Christiaan

  1. Entsorgen Sie die Spitze mit dem Entriegelungskolben

Überprüfen Sie auch, ob Sie die richtige Größe/Art der Spitze haben und eine geeignete Pipette verwenden (z. B. keine 10-100-µl-Pipette für 120 µl verwenden).

Wenn dies immer noch zu falschen Messungen führt, müssen Sie Ihre Pipette möglicherweise kalibrieren lassen.

Testen Sie eine Pipette, indem Sie mehrere Proben nehmen. Wenn das pipettierte Volumen konsistent, aber falsch ist (z. B. immer 10 % unter dem Ziel), deutet dies darauf hin, dass die Pipette kalibriert werden muss, es ist wahrscheinlich nicht die Technik, die falsch ist. Wenn es inkonsistent ist (sowohl Unter- als auch Überpipettieren), liegt es entweder an der Technik oder an der Pipette (schlechte/beschädigte Pipetten können inkonsistent sein, schlecht, aber gut kalibrierte Pipetten sind eher konsistent und müssen nur kalibriert werden).

Versuchen Sie, mehrere Pipetten zu verwenden, wenn sie alle konsistent sind, aber die Varianz darunter ist (Pipette 1 ist immer um ~ 10 % unter, Pipette 2 ist immer um 15 %, Pipette 3 ist immer um ~ 2 % ...), dann Ihre Technik ist gut, und Sie brauchen bessere Pipetten. Holen Sie sich auch einen erfahrenen Pipettierer, um Ihre Technik zu überprüfen und die Pipetten selbst auszuprobieren.

Die Kalibrierung kann intern durch Labortechniker oder durch externe Spezialisten erfolgen, sprechen Sie mit Ihrem Laborverantwortlichen.

Sehen Sie sich auch dieses Video an , das gut erklärt ist.

Zusätzlicher Punkt : Beim Pipettieren von Tensiden und viskosen Flüssigkeiten ist Vorsicht geboten. Flüssigkeiten, die Tenside enthalten, sollten vor dem Dispensieren gut gemischt werden, und das Mischen durch Pipettieren unmittelbar vor dem Dispensieren (mit derselben Spitze) sollte vermieden werden. Mehrere Pipettierrunden erzeugen Blasen in der Spitze und führen zur Aufnahme geringerer Volumina. Viskose Flüssigkeiten sollten vorsichtig pipettiert werden und darauf geachtet werden, dass die Flüssigkeit nicht an der Außenseite der Spitze haften bleibt.
Es ist auch eine gute Idee, das Pipettieren mit seriellen Verdünnungen farbiger Verbindungen zu üben, dann die Extinktion jeder einzelnen zu messen und grafisch darzustellen. Wenn Ihr Hang abweicht, müssen Sie weiter üben oder Ihre Pipetten reparieren.
Es ist lange her, dass ich einen gehalten habe, aber ref. Schritt 8) - sollten Sie die Spitze nicht immer im 45-Grad-Winkel an die Wand des Behälters anlegen; dann bis zum ersten Stopp nach unten drücken; dann bis zur zweiten Haltestelle durchschieben; Kolben gedrückt halten und Pipette entnehmen und prüfen, ob Tropfen im Behälter und Pipettenspitze leer ist? Geben Sie dann ein paar kleine Schläge auf den Behälter, um sicherzustellen, dass sich der Tropfen am Boden des Behälters befindet?

Zunächst muss ich offenlegen, dass ich für Andrew Alliance arbeite , aber ich antworte, um Informationen bereitzustellen und nicht für kommerzielle Zwecke. Was Sie erleben, hängt – wie wir mit unserem Roboter gemessen haben – von der Luftfeuchtigkeit in der Umgebung ab. Wenn 1 nL flüssiges Wasser in der Spitze verdunstet, wird es aufgrund der niedrigen Umgebungsfeuchtigkeit zu 1 ul Wasserdampf über dem Flüssigkeitsspiegel, sodass Ihre Probe um das Äquivalent von 1 ul sinkt. Sie können dieses Phänomen überprüfen, indem Sie die Spitze aus der Flüssigkeit ziehen, den Luftdruck wiederherstellen und die Feuchtigkeit in der Spitze halten und die Flüssigkeit erneut ansaugen. Aus diesem Grund arbeiten Kalibrierlabore eigentlich bei 70 % Luftfeuchtigkeit...

Interessantes Detail, darüber habe ich noch nie nachgedacht.
Gute Pipettiertechnik?
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