Ich versuche, eine Titrationsmenge für ein Molekül zu berechnen, das ich in meinen PCR-Proben verwenden möchte. Unterschiedliche Moleküle haben unterschiedliche Dichten, daher möchte ich die entsprechende Dichte des titrierten Moleküls berechnen. Wie viele Mikrogramm oder Mikromolar Reverse Transkriptase werden in qRT_PCR-Kits verwendet?
Reverse Transkriptase (und die meisten anderen handelsüblichen Enzyme heutzutage) wird rekombinant hergestellt und dann von verschiedenen Lieferanten (und manchmal zwischen verschiedenen Chargen desselben Lieferanten) mit unterschiedlichen Methoden in unterschiedlichem Maße gereinigt. Einige Enzyme haben tatsächlich mehrere funktionelle Einheiten, die in einem Komplex kombiniert sind, andere erfordern möglicherweise einen posttranslationalen Aktivierungsschritt wie die Phosphorylierung durch eine separate Kinase, um voll funktionsfähig zu sein. Alle diese Variablen können Präparate unterschiedlicher molarer Konzentration , aber sehr ähnlicher Aktivität ergeben . Daher haben Unternehmen wie New England Biolabs Einheitsdefinitionen für ihre verschiedenen Produkte basierend auf der Aktivität.
Nachdem ich mich in der Vergangenheit mit NEB befasst habe, weiß ich, dass sie im Allgemeinen auch eine Konzentration für ihre Produkte haben. Wenn Sie also Experimente wie einen Enzyminhibitionstest durchführen, können Sie sowohl für die Konzentration als auch für die Aktivität dosieren. Es ist von Enzym zu Enzym unterschiedlich, ob Ihr Inhibitor überhaupt an ein möglicherweise vorhandenes inaktives Protein bindet, in diesem Fall wäre Aktivität das bessere Attribut für Ihre Berechnungen.
WYSIWYG