DNA-Extraktionsmethoden für Haare?

TLDR: Kann jemand eine Extraktions- und Isolationsmethode(n) für genomische DNA für Haare angeben, die für PCR verwendet wird, im Detail ist vorzuziehen, da ich ein Anfänger bin.

Ich habe versucht, nach DNA-Extraktionsmethoden für Haare (Follikel und/oder Wurzel) zu googeln, und fand verschiedene Quellen, diejenige mit den meisten Details betraf die Verwendung organischer Verbindungen, zu denen wir keinen Zugang haben. Ist ihre bevorzugte Methode zum Extrahieren von DNA aus Haaren, da die genomische DNA in geringen Mengen vorhanden wäre, denke ich, dass dies etwas mit dem Extraktionsprozess zu tun haben könnte.

Können Sie uns bitte etwas Hintergrundwissen geben? Das würde die Beantwortung der Frage erleichtern.
@Chris Das war so ziemlich der gesamte Hintergrund. Ich bin ein Anfänger im Grundstudium, der für die Forschung eines Professors DNA aus Haaren extrahieren muss. Er schickte mich auf diese Aufgabe, um mich selbst zu lernen, glaube ich, aber ich denke, ich bin nicht "auf der Höhe der Zeit", angesichts meiner Frage hier.
@MattDMo Ich habe diese Quelle gesehen, aber mir fehlen die Pulver, um es zu tun.
@RoSiv Wenn Sie schreiben, dass Sie keinen Zugang zu bestimmten organischen Verbindungen haben, ohne anzugeben, was Sie tun können, ist es schwierig, Empfehlungen zu geben.
@Chris Das spricht für meine Unfähigkeit, nehme ich an, ich habe keinen Zugang zu Phenol oder Chloroform und kann die organische Extraktionsmethode nicht durchführen. Möchte ich auch nicht, da ich noch nie damit gearbeitet habe. Ich hatte gehofft, dass es eine "einfache" Lösung mit vielen "üblichen" Laborzutaten geben würde.
Tut mir leid, Sie haben keinen Zugang zu Waschpulver ? Ich finde das sehr schwer zu glauben.
@RoSiv Das sind wichtige Informationen, die zu deiner Frage gehören. Ich bin es gewohnt, mit gefährlichen Chemikalien zu arbeiten (mit der richtigen Schutzausrüstung), da dies Teil meiner Ausbildung ist. Nichts Besonderes daran.
@Chris Wenn ich die organische Phenol/Chloroform-Extraktion durchführen würde, hätten Sie irgendwelche Ratschläge oder Vorschläge, sogar Quellen/Methoden?

Antworten (1)

Ich versuche schon seit einiger Zeit etwas herauszufinden, das funktioniert. Ich habe kürzlich 3 billige Protokolle mit allgemein erhältlichen Laborreagenzien ausprobiert. Ich habe bukkale Proben verwendet (0,2 ml Spucke).

1) Kochen Sie die Probe in Tris-EDTA-Puffer. 2) NaOH-Extraktion. 3) Direkte N-Lyse

Ich verglich sie mit einem genomischen DNA-Extraktionskit (FAST DNA Prep - MP Biomedicals).

Ich habe gehört, dass viele Leute die NaOH-Extraktion verwenden , um DNA aus Gewebe- und Zellpräparaten zu gewinnen, aber keiner der ersten drei hat nach 2-3 Versuchen für mich funktioniert. Einer der Leute in meinem Labor sagte, dass ich den Perlenschläger durch Vortexen mit Glasperlen ersetzen könnte.

Ich habe versucht, mit Perlen mit allen vier Methoden zu verwirbeln, einschließlich des Kits, und nur das Kit hat funktioniert. Ich habe ein PCR-Ergebnis von Kontrollprimern erhalten.

Wenn Sie sich die Kosten für die Beschaffung aller Zutaten für die Puffer-Kits ansehen, sind sie nicht so teuer - 1 − 2 pro Probe.

Viele dieser Kits können mit festen tierischen Geweben umgehen, obwohl das, das ich habe, Haare nicht speziell zitiert. Ich würde es ausprobieren.

Ich schätze, der Sinn meines Beitrags war, dass es viele einfach klingende veröffentlichte Methoden gibt, aber sie liefern nicht immer Ergebnisse ohne viel Debugging. Ich weiß, dass die alkalische Lyse bei mehreren Leuten, die ich kenne, funktioniert hat und die Grundlage der Kits ist. Es ist ziemlich einfach.

Das ist jedenfalls meine Erfahrung.

Toll, dich aktiv zu sehen (du bist einer von zweien mit 20.000+ und vollen Privilegien nach dem Abschluss :-) ! Ich habe mich jedoch gefragt, ob die Mundhöhle Haare enthält, angesichts der Frage des OP?
Großartig, interessant, +1!
DNA-Extraktionsmethoden für Haare?
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