qPCR: Kreuzkontamination beim Versiegeln der Platte

Ich versuche, eine Echtzeit-PCR auf einem Plasmid durchzuführen, und ich habe meine positiven und negativen Kontrollen nahe beieinander, zusammen mit einer Kontrolle ohne Vorlage. 1 ul meines Templates gebe ich zuletzt in die 96er Platten (an der Seitenwand des Wells, um genau zu sein) und verschließe die Platte mit optischem Klebesiegel (mit der Hand andrücken) und zentrifugiere danach.

Während des Versiegelns habe ich bemerkt, dass der Schablonentropfen, den ich an der Seite der Vertiefungen hinzufüge, aufgesogen wird und sich wahrscheinlich in die benachbarten Vertiefungen ausbreitet. Geben Sie hier die Bildbeschreibung einIch bemerke eine Verstärkung sogar in Brunnen, in denen ich Wasser anstelle der Schablone hinzugefügt habe

Ist jemandem das auch aufgefallen oder hat er einen Tipp, wie man das vermeiden kann? Geben Sie die Vorlage in die Flüssigkeit im Well oder auf die Seitenwand?

Antworten (1)

Ich kann nicht sagen, dass mir das schon mal passiert ist (aber mache auch nicht ständig qPCR).

Im Prinzip sollte es in Ordnung sein, die Schablone an der Seite des Brunnens hinzuzufügen, da Sie so auch visuell bestätigen können, dass Sie die Schablone hinzugefügt haben. Wenn Sie jedoch Probleme haben, sollten Sie die Vorlage der Flüssigkeit hinzufügen.

Als weitere Möglichkeit, dieses Problem zu vermeiden, würde ich versuchen, die Klebefolie zuerst leicht aufzulegen und dann mit etwas Stabilem, das eine gerade Kante hat, herunterzudrücken/fixieren (dafür gibt es spezielle Plastiksachen, aber eine Trinkgeldbox kann es auch Arbeit).

Danke für die Antwort. Ich habe im Labor einen Plastikapplikator gefunden, um Platten zu versiegeln. Ich werde es versuchen und sehen, ob es das Ergebnis verbessert.
Ich habe jetzt versucht, mit einer geraden Kante zu versiegeln, und es saugt die Proben definitiv nicht auf oder kontaminiert sie nicht. Danke für den Hinweis!
qPCR: Kreuzkontamination beim Versiegeln der Platte
AntwortenHierDatenschutz-Bestimmungen1y, 0v